第三章-分子发光分析法.pptVIP

第三章分子发光分析法分子荧光、磷光分析法的基本原理介绍荧光磷光光谱的产生、主要影响因素、荧光强度与被测物质之间的关系分子荧光分析仪器分子荧光定量分析化学发光和电致化学发光§3.1概述一、分子发光分析法及其分类某些物质的分子吸收一定能量后，电子从基态跃迁到激发态，以光辐射的形式从激发态回到基态，这种现象称为分子发光，在此基础上建立起来的分析方法为分子发光分析法根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类：光致发光：以光源来激发而发光电致发光：以电能来激发而发光—原子发射光谱法生物发光：以生物体释放的能量激发而发光化学发光：以化学反应能激发而发光—化学发光分析法电致化学发光：以电化学能氧化进而发生化学反应，再由化学反应能激发而发光—电化学发光分析法二、分子荧光分析法的特点1.灵敏度高荧光强度随激发光强度增强而增强（提高激发光强度，可提高荧光强度)2.选择性好不同的物质用不同的光进行激发，选择不同的激发光波长不同的物质发射的荧光不同，选择不同的检测荧光波长比较容易排除其它物质的干扰，选择性好3.实验方法简单4.待测样品用量少；仪器价格适中；测定范围较广据发光强度可定量测定许多痕量的无机物和有机物，广泛应用在生物化学、分子生物学、免疫学及农牧产品分析、卫生检疫等领域。荧光法比磷光法应用广泛，不如分光光度法§3.2荧光和磷光光谱法一、荧光和磷光光谱的产生具有不饱和基团的基态分子光照后，价电子跃迁产生荧光和磷光基态分子价电子跃迁到激发态1.电子自旋状态的多重性大多数分子含有偶数电子，基态分子每一个轨道中两个电子自旋方向总是相反的??，处于基态单重态。用“S0”表示；当物质受光照射时，基态分子吸收光能产生电子能级跃迁，由基态跃迁至更高的单重态，电子自旋方向没有改变，净自旋=0.这种跃迁是符合光谱选律的若分子中电子跃迁过程中伴随着自旋方向的改变，由基态单重态→激发三重态，净自旋?0。这种跃迁为禁阻跃迁T1、T2、T3分别表示第一、二、三激发三重态分子中电子受激跃迁到激发态后，处于激发态的分子是不稳定的，去激返回到较低激发态或基态时有两种方式：无辐射去激和辐射去激2.无辐射去激——不伴随发光现象的过程叫无辐射去激，体系内的多余的能量以热的形式释放。包括：内部转换（IC）—相同的多重态之间的转换S-S系间窜跃（ISC）—不同的多重态之间的转换S-T振动驰豫（VR）—同一电子能级中，从较高振动能级到较低振动能级的过程外部转移—指激发态分子与溶剂分子或溶质分子的相互作用及能量转移，使荧光或磷光强度减弱或消灭发生系间窜跃电子需转向，S1—T1间进行，比内部转换困难3.荧光和磷光光谱的产生—辐射去激处于S1或T1态的电子返回S0态时，伴随有发光现象，这种过程叫辐射去激S1或T1S0（2）磷光当受激电子降到S1的最低振动能级后，未发射荧光，而是经过系间窜跃到T1振动能级，经振动驰豫到T1最低振动能级，从T1最低振动能级回到基态的各个振动能级所发射的光叫磷光从T1?S1要改变电子自旋，发光速度慢，约为10-4~10s，光照停止后，磷光仍可持续一段时间分子相互碰撞的无辐射能量埙耗大，所以磷光的波长更长?磷?荧?激???*易产生荧光n??*易产生磷光二、荧光、磷光与分子结构的关系了解荧光与分子结构的关系，可以预测哪些物质能产生荧光，在什么条件下产生，以及发射的荧光有什么特征以便更好地运用荧光分析技术，采取一些措施把不发荧光的物质产生荧光，即把非荧光体变成荧光体，弱荧光体变成强荧光体（一）荧光效率荧光强度常用荧光量子效率φf来描述荧光量子效率?f=若以各种跃迁速率常数来表示Kf为荧光发射过程的速率常数——取决于物质的化学结构∑Ki为非辐射跃迁的速率常数之和——主要取决于化学环境，也与化学结构有关分析上有应用价值的荧光化