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第七章酶学分析技术

第一节酶活性测定的基本知识01第二节酶活性测定方法及酶学分析的类型02第三节同工酶测定03第四节酶学分析在临床诊断上的应用04第五节酶活性测定最适条件的选择05本章内容概要：

掌握酶活性的国际单位定义，酶活性浓度的表示方法及酶活性单位的计算公式；酶活性测定的连续监测法和定时法的概念、区别和结果的计算方法；酶偶联反应的在酶活性测定和酶法分析代谢物中的应用；以NAD（P）H为指示系统和色素原底物在酶活性测定中的应用.本章教学要求：熟悉酶促反应进程；酶促反应底物动力学；酶学分析在临床诊断上的应用。了解Km值、Vmax值的应用及Km和Vmax的测定；同工酶测定和酶活性测定最适条件的选择。

01第一节酶活性测定的基本知识02酶活性的概念酶活性单位酶活性单位的计算酶促反应进程酶促反应底物动力学

01酶活性的概念酶活性即酶促反应速度，指在规定条件下单位时间内底物的减少量或产物的生成量。02底物浓度为〔S〕,产物浓度为〔P〕,时间为t，反应速度为v0304v=-d〔S〕/dt或v=d〔P〕/dt。注：在实际测定酶促反应速度时，以测定单位时间内产物的生成量为好。05

二、酶活性单位惯用单位：酶活性测定方法的建立者所规定的单位。国际单位：1IU指在规定条件（最适pH，最适底物浓度）下，每分钟转化1?mol底物的酶量。单位为IU/L。Katal单位：1Katal指在规定条件下，每秒钟转化1mol底物的酶量，1Katal=60×106IU。定义：指在一定条件下使酶促反应达到某一速度时所需要的酶量。酶活性单位是一个人为规定的标准。

酶活性单位的计算步骤：运用公式进行计算。明确测定方法的酶单位定义，按照酶单位定义确定物质量、体积和时间的单位，12

计算公式:产物的增加量每单位规定的保温时间1000（ml）酶单位/升=—————————×——————————×————————每单位规定的产物增加量实际保温时间实际标本用量（ml）分光光度法测定的公式：（A测定–A对照）·V总·106每单位规定的保温时间酶单位/升=—————————×————————?·L·V标实际保温时间

四、酶促反应进程酶促反应进程曲线

酶促反应初速度04酶活性03通过酶活性测定间接测得酶的含量，因此，要准确测定酶量，应使酶浓度（〔E〕）与酶促反应速度成正比，即〔E〕∝-d〔S〕/dt或〔E〕∝d〔P〕/dt。能够真正代表酶活性大小的是线性期的酶促反应速度，即酶促反应初速度。酶活性测定时首先要确定线性期，在此期测定反应速度才能准确代表酶活性。01酶的含量02酶量的测定：

酶促反应进行时，酶首先与底物结合为中间产物，然后再催化底物反应生成产物。E+S?ES→E+P中间产物学说：五、酶促反应底物动力学

米-曼氏方程：Vmax〔S〕v=—————〔S〕+Km上式中v代表反应速度，Vmax代表最大反应速度，〔S〕代表底物浓度，Km称为米氏常数。020301

（一）米氏常数的定义由米-曼氏方程可以导出：（Vmax-v）〔S〕Km=———————v当v=1/2Vmax时，Km=〔S〕。因此Km值为反应速度相当于最大反应速度一半时的底物浓度。Km值是酶的特征常数，具有重要的应用价值。

条件下测定其Km值加以鉴定。类的酶其Km值不同，对于一种未知的酶，可在规定的酶的种类和底物的性质有关，与酶的浓度无关。不同种Km值是酶的特征常数，在反应条件一定时，只与CBAD（二）Km值的应用1.鉴定酶的种类

表7-1某些酶的Km值酶底物Km(mmol/L)乳酸脱氢酶丙酮酸0.017己糖激酶D-葡萄糖0.05D-果糖1.5?-半乳糖苷酶D-乳糖4.0碳酸酐酶H2CO39.0过氧化氢酶H2O225蔗糖酶