实验一培养基配制.pptVIP

**实验一培养基配制第1页，共10页，星期日，2025年，2月5日实验一培养基的配制及其灭菌实验二外植体灭菌及其初代培养物的建立第2页，共10页，星期日，2025年，2月5日实验一培养基配制及其灭菌一、实验目的了解培养基制备方法及灭菌技术。二、实验原理培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供近似生物体内生存的营养环境。一般常用MS培养基，无机盐浓度较高，能满足组织快速生长的需求。为减少称量的工作量和误差，一般先配制培养基的各种母液，然后按需要量加入。三、实验材料1、实验药品2、实验用具四、实验步骤1、MS培养基母液的配制（1）大量元素母液（母液1）N、P、K、Ca、S、Mg（2）微量元素母液（母液2）Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、Ni（3）鉄盐母液（母液3）Fe（4）有机物质母液（母液4）NAA、6-BA、GA3第3页，共10页，星期日，2025年，2月5日MS培养基配制表母液化合物含量（终浓度）mg/L母液称量（mg）体积（ml）吸取量（ml/L）1号NH4NO3KNO3KH2PO4MgSO4.7H2OCaCl2.2H2O1650190017037044082509500850185022005001002号ZnSO4.7H2OMnSO4.4H2OH3BO3NaMoO4.2H2OCuSO4.5H2OCoCl2.6H2OKI8.622.36.20.250.0250.0250.838602230620252.52.5831000103号Na2－EDTAFeSO4.7H2O37.2527.85372.5278.5100104号盐酸硫胺素VB1盐酸吡哆醇VB6甘氨酸烟酸（VB3）肌醇0.40.520.51004520510001005第4页，共10页，星期日，2025年，2月5日2、植物生长调节物质的配制母液含量（终浓度）mg/L母液称量（mg）体积（ml）吸取量（ml/L）NAA2210001006-BA20210010GA310550075配制方法：NAA：称2㎎NAA，加少量95%酒精溶解，再加水定容至1000ml。6-BA：称2㎎的6-BA，加少量1mol/L的NaOH溶解，再加水定容至100ml。GA3：称5㎎，加水定容至500ml。第5页，共10页，星期日，2025年，2月5日3、MS固体培养基的配制、分装和灭菌（1）取一只1L烧杯，放入约500mL蒸馏水，依次加入母液1（100mL）、母液2（10mL）、母液3（10mL）和母液4（5mL），并不断搅拌。（本实验2L，先配1L，再配1L）（2）加入植物生长调节物质（NAA:100ml,6-BA:10ml,GA3:75ml）和30g蔗糖，待蔗糖溶解后加蒸馏水定容至1L。（3）加入琼脂（0.6g/L），加热溶解。（5）调整pH6.5。（6）将培养基分装到锥形瓶中，每瓶约300mL.（7）灭菌。放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃、0.105Pa灭菌15min。（8）倒平板。所倒培养基约占培养皿的1/3。第6页，共10页，星期日，2025年，2月5日五、思考题1、培养基的各种成分在植物体内的生理作用有哪些？2、使用高压灭菌锅在培养基灭菌时应注意哪些问题？第7页，共10页，星期日，2025年，2月5日**