原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
实验一复原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的与要求
掌握复原糖和总糖测定的根本原理，学习比色法测定复原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理
复原糖的测定是糖定量测定的根本方法。复原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是复原糖，双糖和多糖不一定是复原糖，如乳糖和麦芽糖是复原糖，蔗糖和淀粉是非复原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有复原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有复原性的单糖进展测定，再分别求出样品中复原糖和总糖的含量〔复原糖以葡萄糖含量计〕。
复原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸那么被复原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，复原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中复原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需参加一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以。
三、实验材料、主要仪器和试剂
1．实验材料小麦面粉(1000g)
2．主要仪器〔1〕具塞玻璃刻度试管：20mL×11〔2〕滤纸〔3〕烧杯：100mL×2〔4〕三角瓶：100mL×1〔5〕容量瓶：100mL×3〔6〕刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1〔7〕恒温水浴锅〔8〕煤气炉〔9〕漏斗〔10〕天平〔11〕分光光度计
3．试剂
〔1〕1mg/mL葡萄糖标准液
准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，
〔2〕3,5-二硝基水杨酸〔DNS〕试剂
3,5－二硝基水杨酸〔DNS〕试剂：称取gDNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000mL容量瓶中，参加2mol/L氢氧化钠溶液325mL，再参加45g
〔3〕碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于
〔4〕酚酞指示剂：称取g酚酞，溶于250mL70%
〔5〕6MHCl和6MNaOH各100mL。〔分别取59.19mL37%浓盐酸和24克
四、操作步骤
1.制作葡萄糖标准曲线
取7支20mL具塞刻度试管编号，按表1分别参加浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸〔DNS〕试剂，配成不同葡萄糖含量的反响液。
表1葡萄糖标准曲线制作
管号
1mg/mL葡萄糖标准液〔mL〕
蒸馏水〔mL〕
DNS〔mL〕
葡萄糖含量〔mg〕
光密度值〔OD 540nm〕
0
0
2
0
?
1
?
2
?
3
?
4
?
5
?
6
?
将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，用冷水迅速冷却至室温，用蒸馏水定容至20mL，加塞后颠倒混匀。调分光光度计波长至540nm，用0号管调零点，等后面7~10号管准备好后，测出1～6号管的光密度值。以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量〔mg〕为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。
光密度值
光密度值
葡萄糖标准曲线
葡萄糖含量〔
葡萄糖含量〔mg〕
2.样品中复原糖和总糖的测定
〔1〕复原糖的提取
准确称取g食用面粉，放入100mL烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后参加50mL蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使复原糖浸出。过滤，将滤液全部收集在100
〔2〕总糖的水解和提取
准确称取g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸馏水及10mL6MHCl，置沸水浴中加热水解30min,取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，那么不呈现蓝色。水解毕。冷却至室温后参加1滴酚酞指示剂，以6mol/LNaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100mL，过滤取滤液10mL
〔3〕显色和比色
取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别参加待测液和显色剂，将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷水迅速冷却至室温，用蒸馏水定容至20mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进展比色。调波长540nm，用0号管调零点，测出7～10号管的光密度值。
表2样品复原糖测定
管号
复原糖待测液〔mL〕
总糖待测液〔mL〕
蒸馏水〔mL〕
DNS〔mL〕
光密度值〔OD 540nm〕
查曲线葡萄糖量〔mg〕
平均值
7
?
?
?
8
?
?
?
9
?
1
1
?
?
10
?
1
1
?
?
五、结果与计算
计算出7、8号管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的葡萄糖毫克数，按下式计算出样品中复原糖和总糖的百分含量(以葡萄糖计
文档评论（0）