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血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定
TC、TG、HDL-C、LDL-C、Lp(a)、ApoAI、ApoB等。血脂测定项目1检测项目的合理选择临床常规血脂测定:TC、TG、HDL-C及LDL-C这四项,有条件的实验室可测定ApoAⅠ、ApoB及Lp(a)。特殊检查项目:如Apo(AⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ和E)、FFA、CETP、LPL、LCAT测定等,多用于科研或临床特殊病例研究。2一、血脂测定
血脂和脂蛋白检测前应注意的问题分析前主要影响因素有:生物学因素如个体间、性别、年龄和种族等。行为因素如饮食、肥胖、吸烟、紧张、饮酒、饮咖啡和锻炼等。临床因素如①疾病继发;②药物诱导4.标本收集与处理
21抽血前2周保持平时的饮食习惯。除卧床的患者外,一般应坐位休息5分钟后抽血。抽血前3天避免高脂饮食,24小时内不饮酒,不作剧烈运动。应在禁食12~14小时后空腹抽血。抽血前最好停用影响血脂的药物数天或数周,否则应记录用药情况。435建议:
(一)血清外观分析(血清冷置试验)混浊(TG增高)下层浊(VLDL增高)Ⅴ型下层清(VLDL正常)Ⅰ型均匀混浊(VLDL↑)TC正常Ⅳ型上层奶油样(CM↑)TC增高Ⅱa型TC正常正常人清亮(TG正常)TC↑Ⅱb,Ⅲ型空腹血清测TC4℃过夜测TC
胆固醇是人体重要的脂类成分,具有重要的生理功能,如合成类固醇激素,维生素D3胆汁酸,并构成细胞膜成分,TC包括FC(1/3)和CE(2/3),胆固醇与动脉粥样硬化有密切关系,故胆固醇测定是最常用的实验室检测项目之一。01TC测定方法很多,约200多种,分为化学测定法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法(决定性方法)。02(二)血清总胆固醇测定
Liberman-Burchard反应简称L-B反应,胆固醇经冰醋酸,浓硫酸脱水生成3.5-胆烷二烯阳离子,然后被醋酐,浓硫酸氧化生成绿色的胆烷六烯磺酸。呈色稳定性差。01Zak反应胆固醇经冰醋酸,浓硫酸脱水生成3.5-胆烷二烯阳离子,然后在Fe3+存在下氧化生成紫红色胆烷四烯阳离子,灵敏度较L-B反应高7倍,且呈色稳定性好,但试剂腐蚀性极大,不能用于自动化分析。021、化学测定法主要有两类
2、酶法胆固醇酯胆固醇+脂肪酸胆固醇+O2胆烷-4-烯-3酮+H2O2H2O2+4AAP+酚红色亚胺醌+H2OCEHChODPOD试剂中除上述三种酶外,还有胆酸钠和表面活性剂及稳定剂,胆酸钠用于激活CEH,表面活性剂促进胆固醇从脂蛋白中释放。酶法操作简便,快速,试剂无腐蚀性,适合于自动化分析,但也存在有一些不足,CEH对胆固醇水解不完全,表面活性剂影响CEH活性,黄疸血清中过高的胆红素可还原H2O2使结果偏低。
【参考范围】3.10~5.70mmol/L【临床意义】血清TC含量受年龄、性别、饮食和运动等因素的影响。①20岁以上随年龄↑而↑,70岁以后则有下降趋势。②20~40岁阶段男性高于女性,但女性绝经后则高于男性。③城市人群高于农村人群,与饮食和运动有关。④脑力劳动者高于体力劳动者。病理性高胆固醇血症原发性高胆固醇血症、糖尿病、胆道阻塞、肾病综合症、甲状腺功能减退。病理性低胆固醇血症严重贫血、甲亢、营养不良。
血清甘油三脂测定TG是有一分子甘油与三分子脂肪酸组成的化合物,主要存在于VLDL和CM中,临床化学中往往以测定甘油代表TG的含量。TG的测定方法很多,如气相色谱法、高效液相色谱法、红外分光光度法。但上述方法需特殊的仪器设备和技术,故一般只用于研究工作中。临床实验室主要用化学法和酶法。
化学法基本步骤可归纳为四步提取:甘油三脂的提取采用合适的溶剂,使脂蛋白变性提取TG,同时去除干扰物质(磷脂、游离甘油、葡萄糖等),常用方法有:异丙醇抽提,沸石合剂(沸石、高岭土)吸附。异丙醇抽提,氧化铝吸附磷脂。正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提,免去吸附磷脂的操作,后用价廉的正庚烷代替正壬烷。应用较广。
皂化:甘油三脂的水解一般都采用KOH乙醇或KOH异丙醇溶液,60℃,5~15min可使TG完全水解。氧化:甘油的氧化最常用的氧化剂是HIO4,甘油在酸性条件下被氧化成甲醛、甲酸。反应受α-磷酸甘油、葡萄糖、丝氨酸的干扰,故抽提时应尽量除去此类物质的干扰。
显色:显色测定甲醛。常用方法有:01甲醛与变色酸(4.5-二羟-2.7-萘二磺酸)在硫酸溶液中加热生成紫红色化合物。(570nm)02甲醛与乙酰丙酮在氨的存在下缩合成黄色的3.5-二乙酰-1.4-二氢-2.6-二甲基吡啶。(420nm)03
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