恶性肿瘤的基因治疗课件.pptVIP

恶性肿瘤的基因治疗制作人：熊乐聂彬恩重新燃起的希望

GeneTherapy

在“全国首届肿瘤并发症介入治疗学术研讨会”上，专家指出，约有80%-90%的病人死于肿瘤并发症，而非肿瘤本身。据专家介绍，肿瘤并发症是指在自然病程发展过程中，肿瘤发生侵犯、转移到某些脏器，或者是在治疗过程中因手术、放化疗而难以避免所产生的一系列综合病症。肿瘤并发症对患者的生命、生活质量均会产生不同程度的影响，严重的并发症是肿瘤患者的主要死因。专家强调，在全力针对肿瘤的治疗过程中，切不可忽视肿瘤并发症的治疗

目前研究表明，肿瘤细胞逃避机体免疫攻击的可能原因包括肿瘤的抗原调变和异质性、瘤细胞的MHC抗原和共刺激分子表达不足、APC功能缺陷、局部细胞因子缺乏以及游离的免疫抑制性细胞或分子在局部浓聚等，这多种因素最终造成肿瘤局部处于深度的免疫抑制状态，免疫效应细胞在数量和质量上都不足以激发起有效的抗肿瘤免疫应答。因此，试图逆转肿瘤局部的免疫抑制状态，增强原先呈低下状态的肿瘤免疫原性，提高局部活化的免疫效应细胞的数量，以激发起强烈的抗肿瘤免疫反应，可能是机体得以排斥肿瘤的有效手段，这也是目前肿瘤免疫（生物）治疗的一个主要目的

以过继免疫疗法为基础将细胞因子基因导入导入抗肿瘤的免疫效应细胞，回输体内，提高局部细胞因子的浓度，提高其抗肿瘤的活性，从而更有效的激活机体抗肿瘤免疫功能常见的有CTL(细胞毒性T淋巴细胞)、CIK(细胞因子诱导的杀伤细胞)、NK(自然杀伤细胞)、巨噬细胞、LAK(淋巴因子激活的杀伤细胞)和TIL(肿瘤浸润性淋巴细胞日本watanabe实验室将ifn-v基因转到CTL其肿瘤杀伤活性提高2-3倍，在体内抑癌效果明显优于未转基因的CTL一：细胞因子基因导录入免疫效应细胞的基因治疗

利用反义核酸技术在转录和翻译水平上阻断肿瘤细胞中异常基因的表达，从而引起细胞的表型逆转或凋亡四：导入原癌基因和生长因子的反义基因

反义核酸第一类将特异的反义基因重组到表达的载体上导入到靶细胞中转录出反义RNA形成双链RNA阻断mRNA第二类是人工合成寡聚脱氧核糖核苷酸，经化学修饰导入细胞与mRNA结合，形成RNA-DNA杂链或核苷酸三聚体，影响基因的转录或翻译第三类是特异的核酶根据抑癌基因设计出特异的“锤头”或“发夹”结构，它能够催化切割或降解异常表达的mRNA阻断基因的翻译

1：起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(smallinterferingRNAs,siRNAs)。证据表明；一个称为Dicer的酶，是RNaseIII家族中特异识别双链RNA的一员，它能以一种ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因，病毒感染等各种方式引入的双链RNA，切割将RNA降解为19-21bp的双链RNAs(siRNAs)，每个片段的3’端都有2个碱基突出RNAi分之生物学机制

2：RNAi效应阶段，siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物（RNA-inducedsilencingcomplex,RISC）。激活RISC需要一个ATP依赖的将小分子RNA解双链的过程。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距离siRNA3’端12个碱基的位置切割mRNA。尽管切割的确切机制尚不明了，但每个RISC都包含一个siRNA和一个不同于Dicer的RNA酶。另外，还有研究证明含有启动子区的dsRNA在植物体内同样被切割成21-23nt长的片段,这种dsRNA可使内源相应的DNA序列甲基化,从而使启动子失去功能,使其下游基因沉默.

RNAi在肿瘤治疗中的意义ras基因包括K-ras、H-ras、N-ras,是鸟苷酸结合蛋白,对细胞的繁殖、分化和细胞生存起调控作用。ras基因突变可使之处于长期激活GTP结合状态,易导致肿瘤的发生。K-ras基因在人类肿瘤中最普遍活化状态的致癌基因，在肿瘤组织中的突变率30-50%，在胰腺癌中高达85%。突变的Ras基因与正常细胞中的野生型ras基因通常只有一个碱基的不同，但由于RNAi的高度特异性，可以针对肿瘤细胞中突变的ras基因产生抑制作用，而对正常细胞的野生型ras不产生抑制作用。

最近Li-MoChen等报道建立K-rasV12突变基因的siRNA腺病毒表达载体,转染Panc-1胰腺癌细胞诱导凋亡、逆转肿瘤恶性表型。WeiWang等通过构建K-ras基因的siRNA表达框架(siRNAexpressioncassette,SEC)成功抑制胰腺癌细胞株MiaPaCa-2的K-ras表达。Fleming等报道，利用化学合成anti-K-ras-siRNA抑制了PANC-1和MaiPaca-