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毕赤酵母表达重组人干细胞因子的关键技术与特性解析

一、引言

1.1研究背景与意义

干细胞因子（StemCellFactor，SCF）作为一种关键的造血细胞因子，在生命科学领域中具有举足轻重的地位。它是酪氨酸激酶受体c-Kit的天然配体，主要作用于早期造血干细胞与原始造血祖细胞，在诱导这些细胞的存活、增殖与分化过程中发挥着核心作用。造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，具有自我更新、多向分化和归巢（即定向迁移至造血组织器官）的能力，而SCF对造血干细胞的调控，对于维持机体正常的造血功能、保障血细胞的持续生成至关重要。例如，在骨髓造血过程中，SCF能够与其他细胞因子协同作用，促进造血干细胞向各系血细胞分化，确保红细胞、白细胞、血小板等各类血细胞的正常生成，维持人体正常生理功能。

SCF在临床应用领域展现出广阔的前景，具有极高的医学价值。在体内干细胞扩增治疗中，SCF可刺激造血干细胞的增殖，增加干细胞数量，为干细胞移植治疗提供更充足的细胞来源，提高治疗效果。在用于基因治疗的体外培养造血干细胞时，SCF能维持干细胞的活性和分化潜能，确保干细胞在体外培养过程中保持良好的生物学特性，为基因治疗的成功实施奠定基础。对于肿瘤放疗化疗后的患者，其造血功能往往受到严重抑制，SCF作为辅助治疗药物，能够促进造血功能的恢复，加速血细胞的生成，减少感染、贫血等并发症的发生，提高患者的生活质量和生存率。

然而，天然来源的SCF数量极为有限，难以满足科研和临床日益增长的需求。这是因为从天然组织或细胞中提取SCF的过程复杂、成本高昂，且产量极低，无法实现大规模生产。因此，通过基因工程技术制备重组人干细胞因子（recombinanthumanStemCellFactor，rhSCF）成为解决这一问题的关键途径。基因工程技术能够利用特定的表达系统，高效地生产rhSCF，为其广泛应用提供了可能。

在众多基因工程表达系统中，毕赤酵母表达系统脱颖而出，成为生产rhSCF的理想选择。毕赤酵母是一种甲醇营养型酵母菌，其独特的生物学特性赋予了该表达系统诸多显著优势。从经济成本角度来看，毕赤酵母的培养基成分简单，主要包括无机盐、微量元素、生物素、氮源和碳源等，这些原料价格低廉且无毒，培养成本远低于其他表达系统。例如，与哺乳动物细胞表达系统相比，毕赤酵母培养无需使用昂贵的血清等添加剂，大大降低了生产成本。在表达调控方面，毕赤酵母含有强有力的醇氧化酶基因AOX1启动子，该启动子可被甲醇严格调控，只有在甲醇存在的条件下，外源基因才会被诱导表达，这种严谨的调控机制有效避免了表达泄露问题，同时能够实现高水平的表达，其表达水平可比酿酒酵母高10-100倍，甚至能媲美大肠杆菌表达系统。在蛋白加工修饰方面，作为真核表达系统，毕赤酵母具备蛋白质翻译后修饰功能，如糖基化、磷酸化、脂肪酰化等，能够对表达的rhSCF进行正确的折叠和修饰，使其具有与天然SCF相似的生物学活性和结构稳定性，这是原核表达系统（如大肠杆菌表达系统）所无法比拟的。此外，毕赤酵母还具有易于高密度发酵、遗传稳定性好等优点，能够实现大规模工业化生产，满足市场对rhSCF的大量需求。

本研究聚焦于重组人干细胞因子在毕赤酵母中的表达与鉴定，具有重要的理论和实践意义。在理论层面，深入探究毕赤酵母表达系统表达rhSCF的分子机制，有助于进一步丰富基因工程和蛋白质表达领域的理论知识，为优化表达条件、提高表达效率提供理论依据。在实践应用方面，成功构建高效表达rhSCF的毕赤酵母工程菌株，并对表达产物进行准确鉴定，能够为rhSCF的大规模生产和临床应用奠定坚实基础，推动相关生物医药产业的发展，为治疗造血系统疾病、肿瘤等疾病提供新的有效手段，具有广阔的市场前景和社会效益。

1.2重组人干细胞因子概述

重组人干细胞因子是通过基因工程技术制备的一种具有重要生物学功能的蛋白质，在医疗领域具有广泛的应用前景。它在结构、功能、生物学特性等方面展现出独特的性质，为深入了解其作用机制和应用价值提供了基础。

人干细胞因子基因编码273个氨基酸的跨膜蛋白，其中包含25个氨基酸的N端信号序列、189个氨基酸的胞外结构域、23个氨基酸的膜外结构域和36个氨基酸的细胞质结构域。分泌可溶性SCF是通过膜锚定前体的蛋白水解加工产生的，重组人SCF是含有165个氨基酸残基的18.4kDa多肽，其对应于分泌可溶性SCF形式的序列。这种特定的氨基酸序列和分子量赋予了重组人干细胞因子独特的结构稳定性和生物学活性。

重组人干细胞因子在人体生理过程中发挥着不可或缺的作用，尤其是在造血调控方面。它主要作用于早期造血干细胞、原始造血祖细胞，通过与细胞表