真菌镜检的操作流程.docxVIP

真菌镜检是临床微生物学检验中快速、简便的诊断真菌感染的重要方法，主要用于皮肤癣菌、念珠菌、马拉色菌等的初步筛查。以下是标准化的操作流程及注意事项：

一、操作前准备

环境要求

生物安全柜（二级）内操作（避免孢子气溶胶扩散）

实验室通风良好，操作台消毒（75%酒精擦拭）

试剂与器材

物品

用途

10%-20%KOH溶液

溶解角质蛋白，透明化标本

乳酸酚棉蓝染液

增强真菌结构对比度（可选）

无菌手术刀/钝刀片

刮取皮屑、甲屑

无菌镊子

采集毛发、脓液

载玻片、盖玻片

制片

酒精灯

加热加速透明化（谨慎使用）

光学显微镜

配备10×、40×物镜

二、标本采集（关键步骤）

皮肤/甲屑标本

75%酒精消毒皮损周围

用刀片刮取皮损边缘活动性病灶的皮屑（深入鳞屑下层）

甲屑：取病甲与正常甲交界处碎屑，或甲板下粉末状物质

毛发标本

拔取折断、无光泽、松动的病发（根部带毛囊更佳）

体液/脓液

无菌操作取分泌物，直接涂片或离心沉淀物

注意：标本量需充足（避免假阴性），避免污染！

三、制片与透明化

方法1：KOH湿片法（最常用）

将标本置于载玻片中央

滴加1-2滴10%-20%KOH溶液

加盖玻片，轻压排出气泡

透明化处理：

室温静置：10-20分钟（角质较厚标本需30分钟）

微加热：酒精灯火焰上方快速过3-5次（勿沸腾！）→静置冷却

方法2：乳酸酚棉蓝染色法（提高对比度）

标本滴加1滴乳酸酚棉蓝