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重组腺病毒构建,扩增及纯化基本技术操作??
?
一目的基因的克隆(以pshuttle-CMV质粒为例)
1.?????选择适当酶切位点,进行酶切连接,将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。
2.?????重组质粒鉴定:酶切鉴定或测序。
3.?????重组质粒扩增,纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。
4.?????用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒,电泳鉴定质粒完全被切开。
5.?????胶回收线性化质粒,以备共转化使用。
二共转化
1?大肠杆菌BJ5183电转感受态制备
2??????从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌,接种于LB培养基中,37℃
2?
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