细胞生物学 第三章.pptVIP

对于冰冻蚀刻处理的生物膜各个面，国际上统一规定命名称号为：“PS”代表面向细胞质基质的表面（protoplasmicsurface）；“ES”代表背向细胞质基质的表面（extrocytoplasmicsurface），“PF”代表靠近细胞质基质的半边膜撕裂面（protoplasmicface）；“EF”代表背离细胞质基质的半边膜撕裂面（extrocytoplasmicface）。第29页，共65页，星期日，2025年，2月5日2、扫描电镜scanningelectronmicroscopeSEM工作原理不同于透射电镜。是以电子束在样品表面扫描，用闪烁器收集样品表面散射回来的二次电子信号，再经放大，最后在荧光屏上显示出图象。特点：不需要经过复杂处理，即可观察标本的原始外表面。第30页，共65页，星期日，2025年，2月5日第31页，共65页，星期日，2025年，2月5日第32页，共65页，星期日，2025年，2月5日优点：可观察较大、较厚的样品；景深大（景深—聚焦后能清晰看到物象的前后距离范围），所以图像是十分逼真的三维立体形象；其放大倍数是从20—20万倍的连续变倍，不须重复多次对焦，故对观察研究很方便；样品可在样品室内做多方位的水平移动和旋转转动，便于从各个角度来观察样品的全貌。缺点：分辨力不太高，仅0.7-3nm；不能观察样品内部。第33页，共65页，星期日，2025年，2月5日（三）扫描隧道显微镜scanningtunnelingmicroscope，STM是新型探测样品外表的纳米级微观形貌的高级仪器，具有三维立体扫描物体表面的原子尺度高分辨能力，并能在常规大气或液体条件下观测样品，无须强求真空环境条件，也不采用高能电子流去轰击样品，故有利于观察样品的真实自然形态。这是目前开展纳米结构生物学研究的重要技术，已被应用于直接观察DNA分子、RNA分子、蛋白质分子及生物体的微观精细结构。第34页，共65页，星期日，2025年，2月5日第35页，共65页，星期日，2025年，2月5日几种微观检测仪器的性能比较扫描电镜透射电镜X-衍射核磁共振扫描隧道显微镜原子力显微镜SEMTEMX-rayNMRSTMAFM分辨率nm30.2 0.1 0.10.10.1 工作环境真空真空-溶液多种环境多种环境 样品制备容易较复杂困难一般简单简单 观察范围nm以上3nm--nm-μmnm-μm成象机制简单简单复杂复杂一般简单 Nuclearmagneticresonance核磁共振AtomicForceMicroscope原子力显微镜第36页，共65页，星期日，2025年，2月5日二、细胞生化分析（一）组织化学和细胞化学染色法histochemicalandcytochemicalstainingmethods利用某种显色剂能与某种细胞成分特异性相结合，显示特定颜色的原理，对组织和细胞内某些成分进行定位和定性分析的研究方法。可对无机盐、蛋白质、醛类、碳水化合物、脂类、核酸和酶类等多种成分检测鉴定。第37页，共65页，星期日，2025年，2月5日例：孚尔根反应（Feulgen）——特定显示DNA的细胞化学技术。其原理是，经稀盐酸水解打开DNA上嘌呤碱与脱氧核糖之间的连接键，暴露出醛基，由于自由醛基能与无色品红（希夫试剂）反应形成紫红色的化合物，据此可对细胞内的DNA进行定性和定位检测。此外，由于其染色的深度与DNA浓度是成正比关系，所以当孚尔根法染色后，再用显微分光度计测量，即可对细胞内的DNA含量进行定量测定。第38页，共65页，星期日，2025年，2月5日再例：Comori法显示酸性磷酸酶：

磷酸脂磷酸根磷酸铅硫化铅↓（棕黑色）酶解pH5