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【小优细节君】c-Fos的WB怎么做？
Fos超家族包括c-fos、fosB、fosL1和fosL2基因，这些基因编码的亮氨酸拉链蛋白可以与Jun家
族的蛋白二聚，形成转录因子复合物AP-1（ActivatorProtein-1，AP-1）。AP-1结合TPA反应元件和
相关的DNA元件，如cAMP反应元件，从而调节一系列生理过程，并在肿瘤的发生、发展中发挥重要
作用。
图1c-Fos结构
c-fos是Fos家族被发现最早和研究多的成员。既往研究发现，c-fos作为转录因子参与调控细胞的
多种病理生理过程，和许多癌症相关。c-fos的mRNA和蛋白质通常是在刺激后瞬时便开始了转录和翻译，
因此被称为即刻早期基因。
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c-Fos的细胞内定位和转录活性受到严格调控，特别是转录活性可以通过各种丝氨酸和苏氨酸的磷酸
化来增强，包括MAPKp38、ERK1/2，以及ERK1/2活化的激酶Rsk1/2和IκB激酶对它的激活有效。c-Fos
蛋白与细胞分化、增殖、存活以及受缺氧影响的组织稳态以及血管生成等关键功能有关；c-Fos也可以对
包括胶原酶I在内的多种基因的转录起积极作用。
图2血清等因素刺激fos基因表达
那么，在用WB检测c-Fos蛋白的时候，有哪些需要注意的条件呢？
01适当地处理激活c-Fos的表达
c-Fos蛋白在某些组织中稳定地表达，但受到不同的刺激时，在许多细胞中被快速瞬时诱导从而高度
表达。在后一种情况下，c-Fos的积累在转录、mRNA周转和蛋白质稳定性水平上受到控制。血清、生长
因子、肿瘤促进剂、细胞因子、缺氧、营养物质不足和紫外线辐射等均会诱导c-Fos的表达。
a.血清饥饿处理会抑制c-Fos的表达，添加FBS诱导可以促进c-Fos表达。TPA或者PMA处理激
活信号通路。
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b.c-Fos易被泛素降解，可尝试MG132处理，以激活蛋白表达和抑制蛋白体降解。
图3HeLa，NIH/3T3，PC-12，血清饥饿过夜（1，3，5）或PMA/NGF+MG-132处理（2，4，6）
后检测c-Fos
02根据实验需要，提取核蛋白
当受到特殊处理影响，c-Fos蛋白在细胞质和细胞核的定位不固定。在静止细胞中，c-Fos以极少的
量存在于胞质溶胶中。细胞被刺激重新进入生长时，它经历两波表达，第一波在FBS诱导后7.5分钟达到
峰值。在这个阶段，蛋白质是定位的内质网。内质网定位需要Tyr-10和Tyr-30的去磷酸化。第二波表达
发生在诱导后约20分钟，并在1小时达到峰值。在这个阶段，蛋白质变成核定位。
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图4血清刺激NIH-3T3细胞，c-fos在的SNF（可溶性核组分）中积累
03根据条带趋势分析辨认c-Fos结果
c-fos基因编码62kDa蛋白（380个氨基酸），存在多个剪切异构体，最常见的剪切体分子量41kDa。
c-Fos又可与强转录因子c-Jun形成异二聚体，从而形成AP-1复合物。
研究表明，c-F
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