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小优细节君-HIF-1α老是空白条带，究竟为何？

很多刚接触HIF-1α的同学们很容易碰到一个问题，就是做的Western老是空白条带，什么都没有。今天我们就

带着这个问题，一起深入了解下这个缺氧大明星。

发现

美国癌症学家威廉·凯林(WilliamG.Kaelin,Jr.)

英国医学家彼得·拉特克利夫(SirPeterJ.Ratcliffe)

美国医学家格雷格·塞门扎(GreggL.Semenza)

HIF-1的发现得感谢上面三位科学家。我们一直知道氧气的重要性，却不清楚细胞是如何适应氧气水平的变化。

这三位科学家为大家揭示了细胞水平的分子机理以及核心蛋白HIF-1，从而获得诺贝尔生理学或医学奖。

简单描述下发现的过程：首先在缺氧情况下，发现细胞内的促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)会大量表达，

然后发现了增强EPO表达的关键区域——缺氧反应元件(HypoxiaResponseElement，HRE)。最后发现与HRE特异

性结合的蛋白——缺氧诱导因子(Hypoxia-InducibleFactor,HIF）。

结构

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HIF-1结构上是一个异源二聚体，其中一个命名为HIF-1α，另外一个，命名为HIF-1β。HIF-1β又叫芳香烃受体

核转运因子(ArylHydrocarbonReceptorNuclearTranslocator，ARNT)。研究发现，HIF-1β对氧气含量的变化并不

敏感，所以我们的主角就是HIF-1α了。

HIF家族结构域示意图

HIF家族有共同的两个结构域：一个是紫色部分的碱性螺旋-环-螺旋结构域(BasicHelix-Loop-Helix,bHLH)，一

个是绿色部分的Per-ARNT-Sim结构域(Periodicity-ARNT-Single-minded，PAS）。这两个结构域是HIF-1α和

HIF-1β亚基形成异二聚体所必需的。

蓝色是氧依赖降解结构域(Oxygen-DependentDegradation,ODD)，是HIF1受氧调控的关键部位，这个我们

下部分细讲。N-TAD和C-TAD是两个反式激活结构域(transactivationdomain,TAD)，N-TAD位于ODD结构域，

C-TAD可以和CBP/p300等相互作用共同激活下游基因。这两个结构域共同负责HIF-1α转录活性。

HIF-2α在HIF-1α被发现不久后就被克隆出来了。HIF-2α与HIF-1α有48%的氨基酸序列是相同的，功能也类

似，可以与HIF-1β形成异二聚体并结合HRE。不过与HIF-1α的普遍表达不同的是，HIF-2α主要表达在肺，内皮，颈

动脉中。

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后来发现的HIF-3α也在多种组织中表达，同样与HIF-1β形成异二聚体并结合HRE。不过目前HIF-1α和HIF-2

α研究更加广泛，而HIF-3α和其他HIF亚型研究较少，还有待大家去研究。

降解

为什么HIF-1αWestern难做呢，主要就是因为常氧快速降解，还没等你检测，就已经没有了。

HIF-1α信号通路

我们一起来看上面的通路图，在常氧条件下，HIF-1α会发生脯氨酸羟基化（402和564位点都是脯氨酸），细

心的同学还可以看到图中K532也同时发生了乙酰化。这时冯·希佩尔-林道肿瘤抑制蛋白(vonHippel-Lindautumor

suppressorp