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第第4477卷卷11期期宁宁夏夏医医科科大大学学学学报报
年11月月JJoouurrnnaallooffNNiinnggxxiiaaMMeeddiiccaallUUnniivveerrssiittyy窑23窑
：
文章编号1674-6309（2025）01-0023-08
·论著·
新型双荧光素酶启动子报告分析系统的构建与验证
1，21，21，21，21，21，2
吕环环，王胜利，谢娜娜，党洁，霍正浩，马占兵
（1.宁夏医科大学基础医学院，银川750004；2.生育力保持教育部重点实验室，银川750004）
：，该系统
摘要目的构建一种多功能的5’双荧光素酶启动子分析报告系统同时包含萤火虫荧光素酶和海肾
。
荧光素酶元件，以弥补传统分析启动子活性时需同时转入双质粒的不足方法通过基于PCR的长DNA序
列准确合成法（PAS）技术，制备含有双酶切位点的海肾荧光素酶基因和SV40启动子片段，采用重组克隆技
术将其插入pGL3-basic质粒中，构建pGL-Duo双荧光素酶启动子分析报告质粒。随后，采用同源重组克隆技术
（、、
将PGK启动子亚克隆到pGL-Duo质粒的多克隆位点MCS）区。经酶切分析DNA测序293T细胞瞬时转染
以及荧光素酶活性检测，验证pGL-Duo双荧光素酶报告系统的功能是否正常。结果通过酶切分析和DNA测
确，
序，认pGL-Duo报告质粒及其含PGK启动子的版本均构建正确。瞬时转染实验及荧光素酶活性检测显示
（。
PGK启动子能有效启动萤火虫荧光素酶基因表达P约0.01），双荧光素酶启动子报告分析系统功能正常
结论成功构建并验证了一种新型双荧光素酶启动子报告分析系统，可为启动子转录活性及转录因子调
控研究提供高效且便利的方案，适用于大规模启动子筛选、验证以及转录因子表达调控的研究。
基因表达；启动子
关键词：双荧光素酶；质粒；
：：
中图分类号R349.64文献标识码ADOI院10.16050/ki.issn1674-6309.2025.01.004
双荧光素酶报告系统因为其敏感性和高效行信号归一化处理和稳定转染筛选标记。在植物
[1-3]
性，已被广泛应用于研究基因表达调控、启动细胞启动子鉴定和转录因子互作研究领域，有一种
子鉴定筛选和活性分析、蛋白质相互作用以及信采用双启动子（CaMV）设计的单-双荧光素酶报告
[4-5]
号传导途径研究的分子报告系统。该系统分别系统载体（pGreen2x35SLUC），第一个CaMV启动子
利用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶作为报告
初级会计持证人
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