木霉菌REMI变异株筛选及其防治甜瓜枯萎病的效能与安全性评估.docxVIP

木霉菌REMI变异株筛选及其防治甜瓜枯萎病的效能与安全性评估

一、引言

1.1研究背景与意义

甜瓜（CucumismeloL.）作为一种重要的经济作物，在全球范围内广泛种植。其果实香甜可口，富含多种维生素和矿物质，深受消费者喜爱。然而，甜瓜枯萎病（Fusariumwiltofmelon）的频繁发生，给甜瓜产业带来了巨大的经济损失。甜瓜枯萎病是由尖孢镰刀菌甜瓜专化型（Fusariumoxysporumf.sp.melonis）引起的一种土传真菌病害，该病原菌可在土壤中存活多年，一旦条件适宜，便会侵染甜瓜植株。据相关研究表明，在一些甜瓜主产区，由于枯萎病的危害，甜瓜的减产幅度可达20%-50%，严重时甚至绝收。例如，在我国某地区的甜瓜种植基地，因枯萎病的爆发，导致当年甜瓜产量锐减，许多农户血本无归。

传统的化学防治方法虽然在一定程度上能够控制甜瓜枯萎病的发生，但长期大量使用化学农药，不仅会导致病原菌产生抗药性，使得防治效果逐年下降，还会造成果实农药残留超标，危害人体健康，同时对环境也造成了严重的污染。随着人们对食品安全和环境保护意识的不断提高，生物防治作为一种绿色、环保、可持续的防治手段，受到了广泛的关注。

木霉菌（Trichodermaspp.）是一类重要的生防真菌，具有广泛的适应性、广谱性及多机制性，一直被公认为是很有前途的生防因子。木霉菌能够通过重寄生、抗生、竞争等多种作用机制，抑制病原菌的生长和繁殖，从而达到防治病害的目的。此外，木霉菌还能促进植物生长，提高植物的抗逆性。然而，野生型木霉菌在实际应用中存在一些问题，如防效低、防效不稳定等，田间复杂的生产环境会影响其生防效果。

限制型内切酶介导的基因整合技术（Restrictionenzymemediatedintegration，REMI）是一种有效的遗传转化方法，能够在基因组水平上对木霉菌进行改造，获得具有优良性状的变异株。通过REMI技术，可以将外源基因导入木霉菌基因组中，或者对其自身基因进行修饰，从而改变木霉菌的生物学特性，提高其对甜瓜枯萎病的防治效果。因此，筛选具有高效防治甜瓜枯萎病能力的木霉菌REMI变异株，对于推动甜瓜产业的绿色发展具有重要的现实意义。

1.2国内外研究现状

1.2.1甜瓜枯萎病研究现状

甜瓜枯萎病是一种严重威胁甜瓜生产的土传真菌病害，其病原菌尖孢镰刀菌甜瓜专化型具有较强的生存能力和侵染性。在发病症状方面，苗期染病时，病苗叶色变浅，逐渐萎蔫，最后枯死，解剖茎部可发现维管束变色。成株期发病，植株叶片由下而上萎蔫下垂，部分叶片叶缘变褐或产生褐色坏死斑，最终全株枯死。病茎基部有时会出现凹陷坏死斑，在空气潮湿的环境下，病部表面会产生白色至粉红色霉层，病茎基部腐烂纵裂，维管束变褐。根系发病呈水浸状褐色，新根生长受到抑制，严重时根系腐烂。例如，在某甜瓜种植区域，苗期就有部分瓜苗出现萎蔫症状，随着病情发展，成株期大量植株死亡，给农户带来了巨大损失。

在传播途径上，甜瓜枯萎病主要通过土壤、种子和灌溉水传播。病茎、种子或病残体上的菌丝体、厚垣孢子及菌核在土壤和未腐熟的带菌有机肥中越冬，成为翌年初侵染源。在土壤中，病菌从根部伤口或根毛顶端细胞间侵入，进入维管束后在导管内发育，并通过导管从病茎扩展到果梗、果实，随果实腐烂再扩展到种子上，导致种子带菌。播种带菌种子，出苗后即可染病。此外，在维管束中繁殖的大、小分生孢子会堵塞导管，并分泌毒素，引起寄主中毒，致使瓜叶迅速萎蔫。在一些连作的甜瓜种植田，由于土壤中病原菌大量积累，病害传播迅速，发病率极高。

该病的发病条件与环境因素密切相关。高温有利于病害的发生和扩展，当空气相对湿度达到90%以上时，甜瓜易感病。土壤黏重、地势低、排水不良以及管理粗放的地块，发病较重。例如，在夏季高温多雨的季节，甜瓜枯萎病往往容易大面积爆发，尤其是在地势低洼、排水不畅的田块，病害更为严重。

目前，对于甜瓜枯萎病的防治，化学防治和农业防治是主要手段。化学防治主要使用多菌灵、甲基硫菌灵等杀菌剂进行种子处理、土壤消毒和灌根处理。但长期大量使用化学农药，导致病原菌抗药性不断增强，防治效果逐年下降，同时还会造成果实农药残留超标，危害人体健康，对环境也造成了严重污染。农业防治措施包括选用抗病品种、轮作换茬、合理施肥等。然而，抗病品种的选育难度较大，且现有抗病品种的抗病性也会随着病原菌的变异而逐渐丧失；轮作换茬受土地资源和种植结构的限制，实施难度较大；合理施肥等措施虽然能在一定程度上增强植株的抗病性，但难以从根本上控制病害的发生。因此，寻找一种高效、环保的生物防治方法迫在眉睫。

1.2.2木霉菌研究现状

木霉菌作为一类重要的生防真菌，在生物防治领域具有广泛的应用前景。其生防作用主要体现在对多