DB1304T 126-2003 草莓脱毒育苗技术规程.docxVIP

B05

DB

邯郸市地方标准

DJ31304/T126--2003

草莓脱毒育苗技术规程

2003-10-01发布2003-10-10实施

邯郸市质量技术监督局

DB1304/T126--2003

前言

本标准2003年10月1日首次发布本标准由成安县草莓协会提出

本标准起草单位：成安县草莓协会成安县技术监督局

木标准主要起草人：杨建军杨峰梁领军刘建民范振海申光辉

DB1304/T126--2003

莓脱毒育苗技术规程

1范围

本标准规定了草莓脱毒育苗技术的灭菌、育苗、移栽及称苗后初期管理。本标准适用于在.人T控制的环境中进行的草莓茎尖脱毒育苗。

2定义

2.1脱毒育苗(组织培养简称组培)

植物组织培养是指在无菌条件下，将离休的植物器官、组织、细胞以及原生质体，培养在人T控制的环境中使其形成完整的植株。

2.2有菌

指暴露在空气中或曾经接触过自然水源的物体表面，在自然条件下形成的或附带的织菌。

2.3无菌

经物理灭荫法或化学灭菌法处理过的物体，

2.4物理灭菌

指利用高温、射线等杀菌或滤膜过滤除菌等物理措施而进行的灭菌，主要包括：干热、湿热、

射线、超声波、流体过滤等除菌技术措施。

2.5化学灭菌

指利用各种化学药剂，杀灭细菌的技术措施，常用的灭菌剂有：氯化汞、福尔马林、双氧水、来苏水等。

3灭菌

3.1洗涤

3.1.1易洗涤的器皿、用具洗涤

用1%稀盐酸或洗衣粉、肥皂将可溶性无机物除去然后用清水洗净。

3.1.2不易洗涤的器皿用具洗涤

DB1304/T126--2003

3.1.2.1配制洗液

称40g工业用重铬酸钾加入100ml水中，加热致溶解然后冷却，再慢慢注入浓流酸800m,边加边搅拌。

3.1.2.2洗涤方法

将待洗的器具、用具浸泡在洗液中，浸泡时间不低于4小时，再用清水冲洗干净，在洗涤过程中应防止洗液溅到衣服和皮肤上损坏衣服或灼伤皮肤。

3.2接种用具灭菌

3.2.1接种玻璃、金属用具灭菌，宜使用干烘法灭菌，把器皿或用具放胃在电热烘箱或红外线干燥箱内干烘，保持温度170℃干烘2小时，玻璃器具还可用高压蒸汽灭菌。

3.2.2接种常用金属器械(如：刀、剪、镊子等)灭菌，在使用前应用70%酒精棉球仔细擦净，浸泡在70%酒精液中，使用时先在酒精灯外焰上灼烧，侍冷却后使用。

3.2.3接种服、帽子、口罩灭菌

用高温、混热法灭菌，将洗净晾干的衣、帽、口罩用纸包好后放入高压灭荫锅中，待温度达到121℃、湿度达到100%,压力达到1.05MPa时，灭菌30分钟。

3.3培养基灭菌

3.3.1耐热培养基物质灭菌

用高压蒸汽灭菌法灭菌，将耐热培养基物质置于高压灭菌锅中，当温度达到121℃,压力达到

0.105mpa时，灭菌15分种至40分种。

3.3.2不耐热培养基物质灭菌

应采用过滤灭菌法灭菌，将固体物质置.入溶器内然后向溶器内加水，边加边搅拌，加水至固体

物质充分溶解，将溶液用目滤网过滤，液体物质直接用滤网过滤。

3.4植物材料的表面灭菌

3.4.1冲洗

3.4.1.1将采来的植物材料除去不用的部分，用软毛刷或毛笔轻轻刷洗干净，置于烧怀中加入清水，

用木棒轻轻搅拌或直接用流水冲洗。

DB1304/T126-2003

3.4.1.2将清洗干净的植物材料置入每100ml加40g洗衣粉的洗衣粉溶液中，用木棒轻轻搅拌5分

钟，再用清水冲洗干净。

3.4.2表面灭菌

3.4.2.1工作人员换上：工作服，戴上工作帽，用肥皂洗手至肘部，然后用清水冲净，擦干，再用

70%酒精球擦手至肘部。

3.4.2.2将处理好的植物材料和接种用具、灭菌溶液、无菌水、空烧杯、待用培养基等置于无菌工作台上或接种箱中。

3.4.2.3把沥干的植物材料转放到灭过菌的三角瓶或广口瓶中，倒入0.1%氯化汞溶液或20%新沽尔灭溶液，轻轻摇动三角瓶或广口瓶灭菌7分钟-8分钟。

3.4.2.4在灭荫时间大于7分钟，小于8分钟时，将灭菌溶波倒出，倒出灭菌溶液不得倒出植物材料，然后立即倒入无菌水轻轻摇动冲洗，每次冲洗3分钟，冲洗3--10次。

4接种

4.1接种前准备

在接种前10分种，工作人员穿戴好工作服、工作帽，然后用70%酒精擦试工作台和双手。将经过灭菌处理的植物材料和接种用具放置工作台上，将待用试管或三角瓶，水平拿着靠近酒精火焰上烤10-15秒钟。

4.2选材

应选用生长8天—10天的茎尖或造取休眠的茎段经人工催芽15天的顶芽和腋芽。

4.3接种

将经过表面灭菌茎尖材料在解剖镜下，用解剖针一层一层地仔细剥离叶片，直到暴露出圆滑生