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新疆欧洲鳞毛蕨总黄酮的基础研究及抗氧化活性筛选

摘要

本研究旨在深入开展新疆欧洲鳞毛蕨总黄酮的基础研究，并对其抗氧化活性进行筛选。通过超声波辅助提取、大孔吸附树脂纯化等技术对新疆欧洲鳞毛蕨中的总黄酮进行提取分离，运用高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）等手段对黄酮类化合物进行结构鉴定；采用DPPH自由基清除、ABTS自由基清除、羟自由基清除以及超氧阴离子自由基清除实验，结合总抗氧化能力测定，系统评价新疆欧洲鳞毛蕨总黄酮的抗氧化活性，并分析其抗氧化活性与总黄酮含量的相关性。研究结果为新疆欧洲鳞毛蕨资源的进一步开发利用提供理论依据和科学支撑。

关键词

新疆欧洲鳞毛蕨；总黄酮；基础研究；抗氧化活性；活性筛选

一、引言

欧洲鳞毛蕨（Dryopterisfilix-mas）作为鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物，在传统医学中具有一定药用价值。新疆地区特殊的地理环境和气候条件，赋予了当地欧洲鳞毛蕨独特的生物活性成分。黄酮类化合物是植物中一类重要的次生代谢产物，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性。目前，对新疆欧洲鳞毛蕨总黄酮的研究相对较少，其基础化学性质以及抗氧化活性尚未得到系统深入的探究。因此，开展新疆欧洲鳞毛蕨总黄酮的基础研究及抗氧化活性筛选，对于挖掘其潜在药用价值、开发天然抗氧化剂以及合理利用新疆植物资源具有重要意义。

二、材料与方法

（一）实验材料

实验所用新疆欧洲鳞毛蕨采自新疆[具体采集地]，经[专业鉴定人]鉴定为欧洲鳞毛蕨（Dryopterisfilix-mas）。将采集后的植物洗净、晾干，粉碎后过[X]目筛，密封保存备用。实验所用试剂包括乙醇、DPPH、ABTS、硫酸亚铁、过氧化氢、水杨酸等均为分析纯，购自[试剂供应商名称]；大孔吸附树脂（[具体型号]）购自[树脂供应商名称]；标准黄酮类化合物（芦丁、槲皮素等）购自[标准品供应商名称]。

（二）总黄酮的提取与纯化

提取工艺：采用超声波辅助提取法，称取一定量的新疆欧洲鳞毛蕨粉末，按照料液比[X]g/mL加入一定浓度的乙醇溶液，在[超声功率]W、[提取温度]℃条件下超声提取[X]min，重复提取[X]次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到总黄酮粗提物。

纯化工艺：将总黄酮粗提物用适量蒸馏水溶解，通过预处理好的大孔吸附树脂柱，依次用蒸馏水、不同浓度的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩、干燥，得到纯化后的总黄酮样品。

（三）总黄酮含量测定

采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法，以芦丁为标准品，绘制标准曲线。准确称取一定量的纯化后总黄酮样品，用适量乙醇溶解并定容，按照上述比色法测定吸光度，根据标准曲线计算总黄酮含量，以芦丁当量（mgRE/g）表示。

（四）黄酮类化合物结构鉴定

将纯化后的总黄酮样品进行高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）分析，采用[色谱柱型号]色谱柱，以乙腈-水（含[X]%甲酸）为流动相进行梯度洗脱，流速为[X]mL/min，柱温为[X]℃，进样量为[X]μL；质谱采用电喷雾离子源（ESI），正离子或负离子模式检测，扫描范围为m/z[X]-[X]，通过与标准品对照以及质谱裂解碎片信息，鉴定黄酮类化合物的结构。

（五）抗氧化活性测定

DPPH自由基清除实验：取不同浓度的总黄酮样品溶液[X]mL，加入[X]mmol/LDPPH乙醇溶液[X]mL，摇匀后在暗处反应[X]min，于517nm处测定吸光度（A_1）；同时测定等体积样品溶液与乙醇混合液的吸光度（A_2）以及DPPH乙醇溶液与乙醇混合液的吸光度（A_0）。DPPH自由基清除率计算公式为：DPPH自由基清除率（%）=[1-(A_1-A_2)/A_0]×100%。

ABTS自由基清除实验：将ABTS溶液与过硫酸钾溶液混合，在室温下避光反应[X]h，得到ABTS自由基储备液，用乙醇稀释至在734nm处吸光度为0.7±0.02，即得ABTS自由基工作液。取不同浓度的总黄酮样品溶液[X]mL，加入ABTS自由基工作液[X]mL，摇匀后反应[X]min，于734nm处测定吸光度（A_1）；同时测定等体积样品溶液与乙醇混合液的吸光度（A_2）以及ABTS自由基工作液与乙醇混合液的吸光度（A_0）。ABTS自由基清除率计算公式为：ABTS自由基清除率（%）=[1-(A_1-A_2)/A_0]×100%。

羟自由基清除实验：采用Fenton反应体系，取不同浓度的总黄酮样品溶液[X]mL，依次加入[X]mmol/L硫酸亚铁溶液[X]mL、[X]mmol/L水杨酸-乙醇溶液[X]mL