DB65 黑果枸杞原花青素含量的测定液相色谱法.docxVIP

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新疆维吾尔自治区地方标准DB65/T4039—2017

黑果枸杞原花青素含量的测定液相色谱法

DeterminationofPprocyanidinsinlyciumruthenicummurrbyLC

2017-10-11实施2017-09-11发布

2017-10-11实施

新疆维吾尔自治区质量技术监督局发布

DB65/T4039—2017

前言

本标准根据GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求编写。

本标准由新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所提出。

本标准由新疆维吾尔自治区农业厅归口。

本标准起草单位：新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、新疆进出口检验检疫局技术中心、察布查尔县农业技术推广站。

本标准主要起草人：孙涛、王成、安静、赵子刚、曹晓倩、刘河疆、刘圣红、刘俊、关丽菊、韩磊、单江华。

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DB65/T4039—2017

黑果枸杞原花青素含量的测定液相色谱法

1范围

本标准规定了黑果枸杞中原花青素测定的原理、试剂和材料、仪器和设备、测定步骤、液相色谱法测定、计算及精密度的要求。

本标准适用于黑果枸杞含水量在10%以内的原花青素的测定，检出限为1mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

黑果枸杞样品中的原花青素单体、聚合物在加热的酸性条件和铁盐催化下生成深红色花青素离子即氰定的原理，应用液相色谱法测定，经C1柱分离，外标法定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中一级水的标准。实验所需试剂如下：

a)甲醇，色谱纯；

b)异丙醇；

c)正丁醇；

d)甲酸；

e)盐酸；

f)十二水硫酸铁铵；

g)2%硫酸铁铵溶液，称取十二水硫酸铁铵2g,用浓度为2mol/L盐酸溶解，定容至100mL;

h)原花青素标准品，纯度≥98.0%;

i)原花青素标准溶液：称取上0.01g原花青素标准品(精确至0.0001g),甲醇溶解并定容至50mL棕色容量瓶中，浓度为200μg/mL,溶液现用现配；

j)微孔滤膜0.20μm。

5仪器和设备

所使用仪器和设备型号如下：

a)液相色谱仪：配有紫外检测器(TUV);

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DB65/T4039—2017

b)超声波清洗器；

c)离心机，5000r/min;

d)分析天平，感量0.01g;

e)分析天平，感量0.0001g;

f)电热恒温水浴锅。

6测定步骤

6.1试样制备、保存

6.1.1将黑果枸杞样品取可食部分，混合均匀搅拌破碎，装入密闭洁净容器中标记明示。

6.1.2试样如不能及时分析，应置于-18℃冰箱中贮存备用。

6.2提取

准确称取0.2g(0.001g)混匀后的样品于50mL棕色瓶中，加入30mL甲醇，超声处理20min,冷

却至室温后，加入甲醇定容至刻度，摇匀，离心(5000r/min,离心5min),放置澄清后备用。

6.3水解反应

将正丁醇与盐酸按95:5的体积比混合后，取出15mL置于具塞锥形瓶中，加入0.5mL硫酸铁铵溶液 (4.6)和2mL试样溶液，混匀，于恒温沸水浴(100±1)℃加热40min,取下冷却至室温，过0.20um微孔滤膜，待液相色谱仪分析。

6.4标准曲线制备

吸取标准溶液0.05mL、0.25mL、0.5mL、2.5mL、5.0mL置于10mL棕色容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀；得到浓度依次为1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL。各取2mL测定，处理方法见本标准第6.3节的要求，以峰面积对浓度做标准曲线。

6.5注意事项

实验过程中应避免阳光直射。

7液相色谱法测定

7.1液相色谱条件

液相色谱条件如下：

a)色谱柱为Ci8柱(4.5mm×150mm,5μm);

b)流动相水、甲醇、异丙醇、甲酸比例为73:13:6:8;

c)柱