第四章 中药制剂的含量测定.pptVIP

第三节常用定量分析方法四、气相色谱法气相色谱法是以气体为流动相的柱色谱分离分析方法。特点：分离效能高、选择性好、灵敏度高，样品用量少及分析速度快等特点，兼具分离、分析的功能，适用于热稳定性好的易挥发性或可转化为易挥发性组分的分析。适用范围：适用于热稳定性好的易挥发性或可转化为易挥发性组分的分析。第61页，共114页，星期日，2025年，2月5日第三节常用定量分析方法（一）基本原理气相色谱是根据汽化后的试样被载气带入色谱柱，由于各组分在两相间作用不同，在色谱柱中移动有快慢，经一定柱长后得到分离，依次被载气带入检测器，将各组分浓度或质量变化转换成电信号变化记录成色谱图，利用色谱峰保留值进行定性分析，利用峰面积或峰高进行定量分析的方法。第62页，共114页，星期日，2025年，2月5日1、塔板理论将色谱柱的柱效用理论塔板数n或理论塔板高度H衡量，取决于区域宽度（σ、W1/2、W），其计算公式为第三节常用定量分析方法n==5.54=16H=L/n适中：tR为组分的保留时间，σ、W1/2、W分别为组分的标准差、半峰宽和基线宽度。第63页，共114页，星期日，2025年，2月5日若以调整保留时间tR’代替tR，则得到反映色谱柱实际柱效的有效理论塔板数neff。neff==5.54=16Heff=L/neff可见，当tR一定时，峰越窄，则H越小，n越大，柱效越高，分离性能越好。第三节常用定量分析方法第64页，共114页，星期日，2025年，2月5日2、速率理论速率理论研究了色谱过程中各种动力学因素对柱效（峰展宽）的影响，提出了VanDeemeter方程式：H=A+B/u+CuA、B/u、Cu分别为涡流扩散项、分子扩散（纵向扩散）项、传质阻抗项，从而解释了板高随载气流速而改变，且有最佳流速（Hmin）的现象。速率方程式对于色谱分离条件的选择具有指导意义，它可以说明色谱柱的填充均匀程度、载体粒度、载气种类、柱温和固定液膜厚度对柱效、峰扩张的影响。对于开口毛细管柱色谱，涡流扩散项A=0，故VanDeemeter方程式可简化为H=B/u+Cu，其传质阻抗小，柱长又远远大于填充柱，所以毛细管柱的柱效要比填充柱高得多，其理论塔板数达105-106。第三节常用定量分析方法第65页，共114页，星期日，2025年，2月5日3、分离度的计算分离度是衡量分离效果的指标，以相邻两色谱峰峰尖距对峰宽均值的倍数表示，其定义式为：两峰基本分离，R≥1.5两峰完全分离。分离度的影响因素很多，可用基本分离方程式概括如下：a、b、c分别为柱效项，柱选择性项和柱容量项。R==R=abc第三节常用定量分析方法第66页，共114页，星期日，2025年，2月5日4、系统适用性试验按药典标准，中药制剂分析时，需按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，既用规定的对照品对仪器进行试验和调整，以达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。（1）色谱柱的理论板数n在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR和半峰宽Wh/2，按计算色谱柱的理论板数。若测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、柱填充等），使理论板数达到要求。（2）分离度R定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其它峰或内标峰之间有较好的分离度，一般R≥1.5。第三节常用定量分析方法第67页，共114页，星期日，2025年，2月5日第三节常用定量分析方法（3）重复性取各品种项下的对照溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%，也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子，其相对平均偏差也应不大于2.0%。（4）拖尾因子T为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子T是否符合各品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。拖尾因子计算公式为：T=式中，W0.05h为0.05峰高处的峰宽，d1为峰极大至峰前沿之间的距离，除另有规定外，T应在0.9