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成信工环境工程微生物学实验指导

实验一：显微镜的使用与细菌形态观察

实验目的

学习显微镜的正确使用方法，掌握细菌的基本形态特征。

实验材料

显微镜、细菌永久装片、香柏油、擦镜纸等。

实验步骤

1.显微镜的操作

取镜与安放：右手握住镜臂，左手托住镜座，将显微镜放在实验台上，略偏左。

对光：转动转换器，使低倍物镜对准通光孔，调节光圈和反光镜，使视野明亮。

低倍镜观察：将装片放在载物台上，用压片夹压住，移动装片使观察对象对准通光孔。转动粗准焦螺旋，使镜筒下降至接近装片，然后左眼注视目镜，反向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清物像为止。再调节细准焦螺旋，使物像更加清晰。

高倍镜观察：在低倍镜下找到清晰的物像后，将需要观察的部分移至视野中央，转动转换器，换上高倍物镜。调节细准焦螺旋，使物像清晰。若视野较暗，可调节光圈或反光镜。

2.细菌形态观察

观察不同细菌永久装片，识别细菌的基本形态，如球状、杆状、螺旋状等。注意细菌的大小、排列方式等特征。

实验结果

绘制所观察到的细菌形态图，并记录其特征。

注意事项

1.显微镜使用过程中要轻拿轻放，避免震动。

2.换高倍镜时要小心操作，避免物镜碰到装片。

3.使用完显微镜后，要将物镜转离通光孔，下降镜筒，盖上防尘罩。

实验二：细菌的简单染色

实验目的

掌握细菌简单染色的方法，观察细菌的形态。

实验材料

大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等细菌培养物、载玻片、接种环、酒精灯、结晶紫染液、番红染液、香柏油、擦镜纸、显微镜等。

实验步骤

1.涂片

取一块干净的载玻片，用记号笔在载玻片的一端标明菌名。

用接种环取一滴无菌水于载玻片中央，然后用接种环从菌种斜面上挑取少量菌体，与载玻片上的水滴混合均匀，涂成薄而均匀的菌膜。

2.干燥

将涂片放在空气中自然干燥，也可在酒精灯火焰上方稍远处微微加热，使其干燥，但要注意防止菌体烤焦。

3.固定

手持载玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过酒精灯火焰23次，以固定菌体。

4.染色

在涂片上滴加结晶紫染液，覆盖菌膜，染色12分钟。

用蒸馏水冲洗，洗去多余的染液。

5.干燥

用吸水纸吸干涂片上的水分。

6.镜检

在涂片上滴加一滴香柏油，用显微镜观察细菌的形态。

实验结果

观察并记录所染色细菌的形态和颜色。

注意事项

1.涂片时菌膜要薄而均匀，否则会影响观察效果。

2.固定时要注意温度和时间，避免菌体变形。

3.染色和冲洗时要小心操作，防止菌膜脱落。

实验三：细菌的革兰氏染色

实验目的

掌握革兰氏染色的方法，了解革兰氏染色的原理，区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

实验材料

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌培养物、载玻片、接种环、酒精灯、结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红染液、香柏油、擦镜纸、显微镜等。

实验步骤

1.涂片

同简单染色的涂片方法，分别制作大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的涂片。

2.干燥

自然干燥或微微加热干燥。

3.固定

通过酒精灯火焰固定。

4.初染

滴加结晶紫染液，染色1分钟，然后用蒸馏水冲洗。

5.媒染

滴加碘液，作用1分钟，水洗。

6.脱色

滴加95%乙醇，脱色30秒左右，立即水洗。注意脱色时间不宜过长或过短。

7.复染

滴加番红染液，染色2分钟，水洗。

8.干燥

用吸水纸吸干水分。

9.镜检

滴加香柏油，用显微镜观察。革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

实验结果

记录两种细菌的染色结果，判断其是革兰氏阳性菌还是革兰氏阴性菌。

注意事项

1.脱色是革兰氏染色的关键步骤，要严格控制时间。

2.涂片要均匀，避免菌体堆积影响染色效果。

3.每种染液的作用时间要准确掌握。

实验四：培养基的制备

实验目的

掌握培养基的制备方法，了解培养基的类型和用途。

实验材料

牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水、三角瓶、量筒、天平、pH试纸、高压蒸汽灭菌锅等。

实验步骤

1.计算

根据配方计算所需各种成分的用量。例如，配制牛肉膏蛋白胨培养基，配方为：牛肉膏0.3g，蛋白胨1g，氯化钠0.5g，琼脂2g，蒸馏水100ml。

2.称量

用天平准确称取各种成分。

3.溶化

将称好的牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加入适量蒸馏水中，加热溶解。

加入琼脂，继续加热搅拌，使琼脂完全溶化。

4.调pH

用pH试纸测定培养基的pH值，用氢氧化钠或盐酸调节pH至7.07.2。

5.分装

将培养基分装到三角瓶或试管中，注意不要沾