病理科淋巴瘤病理诊断流程指南.pptxVIP

演讲人：日期:病理科淋巴瘤病理诊断流程指南

CATALOGUE目录01样本接收与准备02形态学初步评估03免疫组化分析04分子检测应用05诊断报告编制06质量控制与优化

01样本接收与准备

样本验收标准完整性检查接收样本时需核对患者信息、样本类型及数量是否与申请单一致，确保无遗漏或混淆，同时检查样本容器密封性及固定液是否充足。质量评估特殊样本处理评估组织样本是否满足诊断需求，包括大小（如淋巴结活检需含足够皮质和髓质）、有无挤压或自溶，不合格样本需及时与临床沟通重新取材。针对新鲜组织或需流式细胞术检测的样本，需立即标记并转入专用培养基或低温保存，避免延误后续分子检测。123

固定步骤采用梯度乙醇脱水（70%至100%）和二甲苯透明，确保组织完全脱水和透明，为石蜡包埋奠定基础。脱水与透明化石蜡包埋规范包埋时需注意组织方向（如淋巴结需垂直包埋以显示滤泡结构），包埋后蜡块应无气泡、边缘平整，便于后续切片。样本需在10%中性缓冲福尔马林中充分固定，固定时间依据组织大小调整（小块组织6-12小时，大块组织不超过24小时），避免过度固定影响抗原性。组织处理流程

常规诊断切片厚度为3-4微米，特殊染色或分子检测需调整至1-2微米，确保细胞形态清晰且无刀痕或褶皱。切片制备规范切片厚度控制载玻片需预先涂覆多聚赖氨酸或APES胶，切片烤片温度控制在60-65℃，避免高温导致抗原丢失或组织脱落。防脱片处理HE染色需核质对比鲜明（胞核呈蓝色，胞质呈粉红色），每批次染色需设阳性对照，染色不合格切片需重新制备。染色质量控制

02形态学初步评估

显微镜观察要点重点观察淋巴结结构是否破坏，是否存在滤泡增生、弥漫性增生或结节性增生模式，分析肿瘤细胞排列方式及间质反应。组织结构评估需详细记录肿瘤细胞大小、核形（圆形、不规则或分叶状）、核染色质分布（细腻或粗糙）、核仁是否明显及胞质丰富程度等关键形态学指标。细胞形态特征注意非肿瘤性成分如淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞及纤维组织的比例和分布，辅助判断肿瘤微环境特征。背景成分分析

细胞形态分析小淋巴细胞鉴别需区分慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤（CLL/SLL）与其他小B细胞淋巴瘤，观察细胞核的规则性及染色质凝集程度。大细胞变异识别如伯基特淋巴瘤的“星空现象”或间变性大细胞淋巴瘤的“马蹄形核”，需结合免疫组化进一步验证。针对弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL），需分析中心母细胞或免疫母细胞形态，注意核分裂象数量及坏死区域分布。特殊形态亚型

初步分级标准以细胞大小均匀、核分裂象稀少及组织结构保留为特征，常见于滤泡性淋巴瘤1-2级或边缘区淋巴瘤。表现为细胞异型性显著、核分裂象活跃（10/HPF）及广泛浸润性生长，典型代表为DLBCL或伯基特淋巴瘤。对于难以明确分级的病例（如滤泡性淋巴瘤3级），需结合分子检测或专家会诊以降低误诊风险。低级别淋巴瘤标准高级别淋巴瘤标准交界性病变处理

03免疫组化分析

抗体选择指南靶标特异性验证克隆号与种属匹配抗体组合优化选择抗体前需通过文献检索或实验验证其与目标抗原（如CD20、CD3、CD30等淋巴瘤标志物）的特异性结合能力，避免交叉反应导致假阳性。优先选用经国际认证（如FDA或CE-IVD）的商用抗体。针对不同亚型淋巴瘤（如弥漫大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤）设计抗体组合。例如，B细胞淋巴瘤需包含CD20、PAX5、BCL2；T细胞淋巴瘤需检测CD3、CD5、CD7等。记录抗体的克隆号（如抗CD20的L26克隆）以确保实验可重复性，同时确保二抗种属（如兔抗鼠）与一抗宿主（如鼠源性）匹配。

组织预处理使用3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，血清封闭非特异性结合位点后，滴加一抗（如CD20抗体）4℃过夜或室温1小时，再孵育HRP标记的二抗。阻断与抗体孵育显色与复染DAB显色系统生成棕色沉淀标记阳性信号，苏木素复染细胞核，梯度酒精脱水后封片。全程需设置阳性对照（已知阳性组织）和阴性对照（省略一抗）。石蜡切片需经脱蜡、水化及抗原修复（热修复或酶消化），以暴露被甲醛固定掩蔽的抗原表位。冷冻切片则需快速固定以保持抗原活性。染色技术步骤

结果解读方法阳性定位分析明确抗原表达部位（膜/浆/核），如CD20表达于B细胞膜，而MUM1定位于核，异常定位（如BCL2核表达）可能提示遗传变异。报告规范化需在病理报告中注明抗体克隆号、染色条件及结果描述，例如“CD20（L26克隆）弥漫强膜阳性，支持DLBCL诊断”。半定量评分标准根据染色强度和阳性细胞比例评分（如H-score或Allred评分）。例如，CD30在霍奇金淋巴瘤中需＞50%肿瘤细胞强阳性才具诊断意义。交叉验证与鉴别诊断结合形态学（如RS细胞）和其他标志物（如CD15、EBER-ISH）排除类似病变（如间变性大细胞淋巴瘤与转移癌）。

04分子检测应用

从淋巴