植物组织培养实验.pptxVIP

植物组织培养实验课件制作：沙莎

实验一培养基贮备液（母液）的配制目的与要求：熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法.实验步骤：称量分别溶解混合定容。

一，MS培养基的组成大量成分→贮备液Img/LNH4NO3 1650KNO3 1900CaCl22H2O 440MgSO47H2O 370KH2PO4 170配制20倍浓度贮备液500mL.

2、微量成分→贮备液IImg/L KI 0.83 H3BO3 6.2 MnSO44H2O 22.3 ZnSO47H2O 8.6 Na2MoO42H2O 0.25 CuSO45H2O 0.025 CoCl26H2O 0.025配制100倍浓度贮备液100mL.

3、铁→贮备液IIImg/L FeSO47H2O 27.8 Na2EDTA2H2O 37.3 4、有机成分→贮备液IVmg/L 肌醇 100 烟酸 0.5 盐酸硫胺素(VB1) 0.1 盐酸吡哆醇 0.5 甘氨酸 2配制100倍浓度贮备液100mL.配制100倍浓度贮备液100mL.

6-BA：1mg/mL(溶于少量1N盐酸后以蒸馏水定容）。0102NAA:1mg/mL（先用少量95%乙醇溶解后以蒸馏水定容）。二，常用生长调节剂

三、作业：可将MS培养基分为哪四个部分？分别含有几种试剂？各种试剂的浓度（mg/L）如何？配制MS培养基的20×的贮备液I量为500mL、100×的贮备液II、III和IV各100mL以及BA和NAA（浓度为1mg/mL）各50mL，则应分别称取多少量的各种试剂？注意要点有哪些？

贮备液I(g)贮备液III(mg)MgSO47H2O3.70500mLFeSO47H2O278100mLNH4NO316.50Na2EDTA2H2O373CaCl22H2O4.40生长调节剂KNO319.006-BA50mg50mLKH2PO41.70NAA50mg50mL贮备液II(mg)贮备液IV(mg)KI8.3100mL肌醇1000100mLH3BO362烟酸5MnSO44H2O223盐酸硫胺素1ZnSO47H2O86盐酸吡哆醇5Na2MoO42H2O2.5甘氨酸20CuSO45H2O0.25称量溶解混合定容CoCl26H2O0.25

实验二固体培养基的配制与灭菌实验目的：学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法。实验步骤：称量混合调pH值灭菌

称量：按每瓶培养基终体积50mL计，称取适量的琼脂（常用量8g/L）和蔗糖（常用量30g/L），置于大烧杯中，加蒸馏水至需配培养基终体积的3/4左右，（加热）使之溶解。01混合：分别加入一定量的贮备液I、II、III、IV和生长调节物质及其它特殊补加物，再加蒸馏水直至需配培养基的终体积。02调pH值：充分混合后，在60℃水浴条件下用0.1mol/L的NaOH和0.1mol/L的HCl调节培养基的pH值至5.8。03灭菌：封严培养容器口后，120℃灭菌20min后，将培养基取出，置于水平台子上，在室温下冷却，备用。04

实验三外植体材料的预处理、

消毒及接种实验目的：熟悉外植体材料的预处理，掌握其消毒和接种方法。

二、方法步骤：对采来的植物材料进行适当的预处理。除去不需要的部分，将所需部分切割至适当大小，置自来水龙头下流水冲洗几分钟至几小时，主要视植物材料清洁程度而定。这在污染严重时特别有用。

01用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100ml水）等浸洗上述植物材料约5min，再用自来水冲净洗衣粉水。这是进一步减少污染的处理。02同时配制消毒液：50%次氯酸钠溶液。

将接种用具、无菌水等从80℃烘箱中或直接从高压灭