第高效液相色谱法.ppt

第二十章高效液相色谱法HPLC;（一）HPLC与经典LC区别;表20-1HPLC法与经典LC法性能对比

经典LCHPLC

固定相一般规格特殊规格

固定相粒度(μm)75～5003～10

粒度分布(RSD)20～30％＜5％

柱长（cm）10～1003～25（分析型）

柱内径（cm）2～50.3～0.46

柱入口压强(MPa)0.001～0.12～40

柱效（理论塔片数/m）10～1003×104～8×104

样品用量(g)1～1010-6～10-4

分析所需时间(h)1～200.05～0.5

装置非仪器化仪器化;二、HPLC与GC差别;2．流动相差别

GC：流动相为惰性气体

组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用

HPLC：流动相为液体

流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、

改善分离度增加了因素，对分离起很大作用

流动相种类较多，选择余地广

流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用

选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相

可以增大分离选择性;三、高效液相色谱仪流程图;续前;第二节基本理论和条件选择;一、塔板理论;二、速率理论（与GC对比）;2）涡流扩散项A及其影响;图示;续前;图示;降低板高的途径有：

（1）小粒度（dp小）、均匀的球形化学键合相

（A、C小），匀浆法装柱

（2）低粘度流动相（C小），如甲醇（乙醇与甲醇的理

化性质相似却无毒,但25℃时粘度是甲醇的2倍）

（3）流速不宜过快（1ml/min），（Cu小）

（4）增加柱长L，可增加n，但同时也增加tR,

增加分析时间，一般不可取的。

（5）柱温适当，如室温25℃左右

;;第三节各类高效液相色谱法;一、液固吸附色谱法（LSC）

liquid-solidadsorptionchromatography

流动相为液体，固定相为固体吸附剂;2.影响容量因子k的因素

;续前;二、液液分配色谱法（LLC）;三、化学键合相色谱法（BPC）;（一）化学键合相;（二）反相键合相色谱法;续前;（三）正相键合相色谱法;续前;（四）反相离子对色谱法（IPC或PIC???;反相离子对色谱法模型;（五）反相离子抑制色谱;第四节固定相;第五节流动相（溶剂系统）;（一）流动相对分离的影响（分离方程式）;（二）流动相的极性和选择性

流动相的极性（强度）

正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强

反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强

流动相的选择性

不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故选择性不同

;续前;;（四）溶剂系统选择的一般原则;一、输液系统;;二、色谱柱和进样系统;;三、检测器

1、紫外检测器：适于吸收紫外光的物质

;续前;续前;第八节定性、定量分析方法（同GC法）;二、定量分析方法——同GC（自己看）

1.外标法：应用较为广泛

2.内标法：内标法分为工作曲线法、内标对比法等。

内标对比法：不需知校正因子，又具有内标法的定量准确度

与进样量无关的特点，方法简便实用。

在药物分析中分析结果（含量）常用标示量％表示：;内标对比法：不需知校正因子，又具有内标法的定量准确度与进样量无关的特点，方法简便实用。在药物分析中分析结果（含量）常用标示量％表示：

(Ai/As)样品(ms)样品W

标示量%＝──────×────×──×100% (Ai/As)对照(ms)对照m

式中：

(ms)样品与(ms)对照分别是内标物在试样溶液及对照溶液中的量;

W为平均片重(或丸重等);

m是取样量.;谢谢大家！