自组装法构筑丝素蛋白基纳米微球及其药物释放性能的深度解析.docxVIP

自组装法构筑丝素蛋白基纳米微球及其药物释放性能的深度解析

一、绪论

1.1丝素蛋白概述

1.1.1结构与化学组成

丝素蛋白是一种天然高分子纤维蛋白，主要由蚕茧中的丝素纤维提取而来，在蚕丝中约占70%-80%。其分子由重链（H链，约390kDa）、轻链（L链，约26kDa）以及P25蛋白（约30kDa）组成，重链和轻链通过C末端的二硫键以1:1的比例连接，P25蛋白则通过非共价疏水相互作用与H链和L链结合。丝素蛋白包含18种氨基酸，其中甘氨酸、丙氨酸和丝氨酸含量最为丰富，约占85%。这种独特的氨基酸序列赋予了丝素蛋白许多优良特性，甘氨酸和丙氨酸的侧链较小，使得分子链能够紧密排列，形成稳定的结晶结构，从而增强了丝素蛋白的机械强度。丝素蛋白中还含有少量带有活性基团的氨基酸，如含有羟基的丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸，含有氨基的赖氨酸等，这些活性基团为丝素蛋白的化学修饰提供了位点，使其能够通过与其他分子进行化学反应，引入新的功能，进一步拓展其应用领域。

1.1.2构象与聚集态结构

丝素蛋白常见的构象有无规卷曲、α-螺旋和β-折叠等。在水溶液中，丝素蛋白主要以无规卷曲结构存在，这种结构的分子链呈无序状态，具有较高的自由度。无规卷曲结构并不稳定，在外界条件的影响下，如温度、pH值、有机溶剂、离子强度和剪切力等，容易发生转变。当丝素蛋白受到这些因素作用时，分子链逐渐排列有序，形成α-螺旋或β-折叠构象。α-螺旋结构是一种右手螺旋，分子链通过氢键相互作用维持稳定；β-折叠结构则是由多条分子链平行或反平行排列，通过链间氢键形成片层状结构。其中，反平行β-折叠结构的分子链段排列最为规整，能量最低，因此最为稳定。

丝素蛋白的聚集态结构主要包括SilkI和SilkII两种。普遍认为，SilkI是介于α-螺旋和β-折叠之间的中间状态，属于亚稳定结构，容易向SilkII结构转变。SilkII是以氢键连接的反平行β-折叠结构，具有高度的结晶性和稳定性。这种稳定的聚集态结构使得SilkII结构的丝素蛋白材料在水中难以溶解，但对酸、碱、盐及热的抵抗性强。丝素蛋白的构象和聚集态结构对其性能有着至关重要的影响。不同的构象和聚集态结构决定了丝素蛋白的溶解性、机械性能、生物降解性和生物相容性等。在药物载体应用中，丝素蛋白的构象和聚集态结构会影响药物的负载量和释放速率；在组织工程中，它们则关系到细胞的黏附、增殖和分化。

1.2丝素蛋白微球制备方法概述

丝素蛋白微球的制备方法多种多样，每种方法都有其独特的原理、优缺点及适用场景。膜乳化法是利用膜的微孔结构将丝素蛋白溶液分散成微小液滴，再经过固化形成微球。该方法的优点是能够精确控制微球的粒径和粒径分布，制备的微球尺寸均一。膜乳化法需要特殊的设备和膜材料，成本较高，且制备过程较为复杂，产量较低，适用于对微球粒径要求严格、产量需求不高的应用场景，如药物载体研究中的精准载药实验。

相分离法是通过改变溶液的温度、pH值、添加沉淀剂或有机溶剂等条件，使丝素蛋白从溶液中相分离出来，形成微球。这种方法操作相对简单，不需要复杂的设备。相分离法制备的微球粒径分布较宽，且在相分离过程中可能会对丝素蛋白的结构和性能产生一定影响，常用于对微球粒径均一性要求不高、注重制备简便性的情况，如一些基础研究中的初步材料制备。

乳化法是将丝素蛋白溶液分散在不相溶的油相中，形成水包油（O/W）或油包水（W/O）乳液，再通过交联剂或其他固化手段使丝素蛋白在油滴中固化形成微球。乳化法可以通过调节乳化剂的种类和用量、搅拌速度等参数来控制微球的粒径。乳化法制备过程中可能会残留乳化剂，对微球的生物相容性产生影响，且制备的微球可能存在表面不光滑的问题，适用于对微球表面形貌要求相对较低、需要大量制备微球的情况，如工业上的大规模材料生产。

自组装法是利用丝素蛋白分子在特定条件下的自组装行为，使其自发聚集形成微球。自组装过程通常受到溶液的浓度、pH值、离子强度、温度等因素的调控。自组装法制备工艺简单，不需要添加大量的化学试剂，能够保持丝素蛋白的天然结构和性能。自组装法对制备条件的控制要求较高，微球的粒径和形态可能会受到制备条件波动的影响，在对微球生物活性和天然结构保留要求较高的领域，如生物医学领域的药物缓释和组织工程支架构建中具有独特优势。

1.3丝素蛋白自组装行为及发展趋势

丝素蛋白的自组装行为是指在特定条件下，丝素蛋白分子通过分子间的相互作用，如氢键、疏水相互作用、静电作用等，自发地聚集形成具有特定结构和功能的聚集体。在自组装过程中，丝素蛋白分子的构象会发生变化，从无