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核酸适体探针：血液肿瘤细胞识别的精准工具与稳定性探究

一、引言

1.1研究背景与意义

血液肿瘤作为起源于造血系统的一大类恶性肿瘤，主要涵盖白血病、淋巴瘤和骨髓瘤等。近年来，其发病率呈上升趋势，并呈现年轻化倾向，在我国常见的十大恶性肿瘤中，急性白血病与淋巴瘤均位列前十位。据相关统计，2017年中国与淋巴瘤和骨髓瘤相关的死亡案例达到52,000例，死亡率约为3.83/10万；2016年中国多发性骨髓瘤新发案例为16500例，死亡患者达到10300例。血液肿瘤不仅严重威胁患者的生命健康，给患者家庭带来沉重的经济负担，也对社会医疗资源造成了巨大压力。

目前，血液肿瘤的常规诊断方法包括形态学检查、免疫学检测、细胞遗传学分析和分子生物学检测等。形态学检查主要通过观察细胞的形态和结构来判断肿瘤类型，但主观性较强，且对于一些形态学特征不明显的肿瘤难以准确诊断；免疫学检测利用抗体与肿瘤细胞表面抗原的特异性结合来识别肿瘤细胞，但抗体的制备过程复杂，成本较高，且存在免疫原性等问题；细胞遗传学分析通过检测染色体异常来辅助诊断血液肿瘤，但技术要求高，检测周期长；分子生物学检测如PCR等技术虽然灵敏度高，但特异性有待提高。这些传统诊断方法存在着敏感性低、易产生假阳性信号、检测成本高、操作复杂等局限性，难以满足临床早期诊断和精准治疗的需求。

核酸适体是通过配体指数富集法进化系统（SELEX）技术在体外合成筛选所得的单链寡核苷酸（DNA或RNA）。它能折叠成独特的空间结构，特异性识别结合靶标分子，功能上类似于抗体，但与靶向目标的特异结合优于抗体。核酸适体具有诸多优势，如对靶标具有高亲和力，解离常数可达nmol～pmol级；识别靶标的特异性非常高，能区分个别氨基酸基团不同的同源蛋白；分子量更小、稳定性更高、无免疫原性、组织穿透性强、易化学合成和易功能修饰等。将核酸适体作为新型分子探针应用于血液肿瘤细胞的识别，有望克服传统诊断方法的不足，实现血液肿瘤的早期、精准诊断。此外，核酸适体的稳定性对于其在临床诊断和治疗中的应用至关重要，研究核酸适体探针的稳定性影响因素，有助于优化其性能，提高临床应用价值。因此，开展核酸适体探针对血液肿瘤细胞的识别及其稳定性研究具有重要的理论意义和实际应用价值，为血液肿瘤的诊断和治疗提供新的思路和方法。

1.2国内外研究现状

在国外，核酸适体在血液肿瘤领域的研究开展较早且取得了一系列成果。一些研究利用细胞-SELEX技术筛选出针对特定血液肿瘤细胞的核酸适体，如针对急性淋巴白血病CCRF-CEM细胞的核酸适体sgc8c，能够特异性识别并结合该细胞，基于此构建的检测方法实现了对CEM细胞的特异性检测，在没有结合信号DNA扩增检测技术的情况下，每毫升104个目标细胞即可产生明显的检测信号。同时，在核酸适体稳定性研究方面，国外学者通过对核酸适体进行化学修饰，如2-氟代修饰、锁核酸修饰等，有效提高了其在血清等复杂环境中的稳定性，延长了其半衰期。

国内在该领域的研究也在不断推进。科研人员通过改进SELEX技术，提高了核酸适体的筛选效率和特异性。例如，采用基于磁珠的SELEX技术，使得筛选过程更加简便高效，能够快速获得高亲和力的核酸适体。在核酸适体应用研究方面，国内学者将核酸适体与纳米技术相结合，构建了多种新型的检测平台，如基于核酸适体和信号DNA功能化金纳米颗粒的肿瘤细胞检测探针，提高了检测的灵敏度和准确性。然而，当前研究仍存在一些不足与空白。在核酸适体对血液肿瘤细胞的识别机制研究方面还不够深入，对于核酸适体与肿瘤细胞表面靶标的结合模式、结合后的信号传导途径等了解有限。在稳定性研究方面，虽然化学修饰能够提高核酸适体的稳定性，但修饰后的核酸适体可能会对其与靶标的亲和力和特异性产生影响，如何在提高稳定性的同时保持其生物学活性，还需要进一步探索。此外，目前针对不同类型血液肿瘤细胞的特异性核酸适体种类仍然有限，难以满足临床多样化的诊断需求。

1.3研究目标与内容

本研究旨在深入探究核酸适体探针对血液肿瘤细胞的识别机制与稳定性影响因素，并提出相应的优化策略，具体研究内容如下：

核酸适体探针对血液肿瘤细胞的识别研究：利用细胞-SELEX技术，针对多种血液肿瘤细胞进行核酸适体的筛选，获得高亲和力和特异性的核酸适体探针。通过多种实验技术，如流式细胞术、荧光显微镜技术等，研究核酸适体探针对不同环境（如结合缓冲液、小鼠血清等）中血液肿瘤细胞的识别能力，明确其识别的最佳条件。

核酸适体探针的稳定性研究：考察核酸适体探针在血清等复杂生物环境中的稳定性，包括其识别血液肿瘤细胞能力的稳定性以及核酸链的降解情况。研究不同化学修饰方法对核酸适体探针稳定性的影响，测定修饰后核