气相色谱仪使用方法及实验操作步骤.docxVIP

液相色谱仪、气相色谱仪、原子吸收分光光度计、红外光谱仪、核磁共振、原子发射光谱等分析仪器

气相色谱仪使用方法及实验操作步骤：

????A、打开氮气、氢气、空气发生器的电源开关(或氮气钢瓶总阀)，调整输出压力稳定在0.4Mpa左右（气体发生器一般在出厂时已调整好，不用再调整）。

????B、打开色谱仪气体净化器的氮气开关转到“开”的位置。注意观察色谱仪载气B的柱前压上升并稳定大约5分钟后，打开色谱仪的电源开关。

????C、设置各工作部温度。TVOC分析的条件设置：(a)柱箱：柱箱初始温度50℃、初始时间10min、升温速率5℃/min、终止温度250℃、终止时间10min;(b)进样器和检测器：都是250℃。脂肪酸分析时的色谱条件：(a)柱箱：柱箱初始温度140℃、初始时间5min、升温速率4℃/min、终止温度240℃、终止时间15min;(b)进样器温度是260℃，检测器温度是280℃。

????D、点火：待检测器（按“显示、换档、检测器”可查看检测器温度）温度升到150℃以上后，打开净化器上的氢气、空气开关阀到“开”的位置。观察色谱仪上的氢气和空气压力表分别稳定在0.1Mpa和0.15Mpa左右。按住点火开关（每次点火时间不能超过6~8秒钟）点火。同时用明亮的金属片靠近检测器出口，当火点着时在金属片上会看到有明显的水汽。如果在6~8秒时间内氢气没有被点燃，要松开点火开关，再重新点火。在点火操作的过程中，如果发现检测器出口内白色的聚四氟帽中有水凝结，可旋下检测器收集极帽，把水清理掉。在色谱工作站上判断氢火焰是否点燃的方法：观察基线在氢火焰点着后的电压值应高于点火之前。

????E、打开电脑及工作站（通道一分析脂肪酸，通道二分析碘），打开一个方法文件：脂肪酸分析方法或碘分析方法。显示屏左下方应有蓝字显示当前的电压值和时间。接着可以转动色谱仪放大器面板上点火按钮上边的“粗调”旋钮，检查信号是否为通路(转动“粗调”旋钮时，基线应随着变化)。待基线稳定后进样品并同时点击“启动”按钮或按一下色谱仪旁边的快捷按钮，进行色谱数据分析。分析结束时，点击“停止”按钮，数据即自动保存。

????F、关机程序：首先关闭氢气和空气气源，使氢火焰检测器灭火。在氢火焰熄灭后再将柱箱的初始温度、检测器温度及进样器温度设置为室温（20-30℃），待温度降至设置温度后，关闭色谱仪电源。最后再关闭氮气。

高效液相色谱

我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表：

方法

项目

数量

1985年版

1990年版

1995年版

2000年版

HPLC法

鉴别

9

34

150

检查

12

40

160

含量测定

7

60

117

387

鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多，因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。

TOC\o1-3\h\z\u三、色谱法分类 3

四、色谱分离原理 3

II．基本概念和理论 4

一、基本概念和术语 4

二、塔板理论 7

三、速率理论（又称随机模型理论） 8

III．HPLC系统 9

一、输液泵 9

二、进样器 11

三、色谱柱 12

四、检测器 14

五、数据处理和计算机控制系统 17

六、恒温装置 17

IV．固定相和流动相 17

一、基质（担体） 17

二、化学键合固定相 19

三、流动相 20

1．流动相的性质要求 20

2．流动相的选择 20

3．流动相的pH值 21

4．流动相的脱气 21

5．流动相的滤过 22

6．流动相的贮存 22

7．卤代有机溶剂应特别注意的问题 22

8．HPLC用水 22

V．HPLC应用 23

一、样品测定 23

二、方法研究 23

附件：高效液相色谱法（HPLC）复核细则 24

一、对起草单位的要求： 24

二、对复核单位的要求： 24

二、HPLC的特点和优点

HPLC有以下特点：

高压——压力可达150~300Kg/cm2。色谱柱每米降压为75Kg/cm2以上。

高速——流速为0.1~10.0ml/min。

高效——可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。

高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。

HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：

速度快——通常分析一个样品在15~30min，有些样品甚至在5min内即可完成。

分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。

灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。

柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。

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