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大麦黄花叶病相关NAC转录因子的克隆鉴定与功能解析

一、引言

1.1研究背景

大麦作为全球重要的粮食作物之一，在人类饮食和动物饲料领域都占据着重要地位。其适应性强，能够在多种气候和土壤条件下生长，是许多地区农业经济的重要组成部分。然而，大麦黄花叶病的频繁爆发给大麦生产带来了巨大挑战。

大麦黄花叶病是一种由大麦黄花叶病毒（Barleyyellowmosaicvirus，BaYMV）引起的病毒性病害，该病毒主要通过土壤中的禾谷多粘菌（Polymyxagraminis）传播。在发病初期，大麦叶片上会出现与叶脉平行排列的浅黄绿色短线条状至椭圆形不规则形小病斑，随着病情的发展，病斑逐渐扩大并融合，形成黄色花叶。严重时，病叶会变成深黄色至橙黄色，类似生理性发黄，后期黄色花叶会转变成黄色条斑，粗叶脉呈绿色，甚至剑叶鞘、颖壳也会出现黄斑。病株通常会表现出矮化现象，容易早枯，部分植株甚至无法抽穗，即使能够抽穗，穗型也较小，空秕粒增多，导致大麦产量大幅下降，品质严重受损。

在我国，大麦黄花叶病主要发生在长江流域一带，包括江苏、浙江、上海、安徽、湖北等省（市），这些地区气候湿润，适宜病毒传播和病害发生。据相关统计，在病害严重爆发年份，部分地区大麦产量损失可达30%-50%，给当地农业经济造成了沉重打击。目前，针对大麦黄花叶病的防治措施主要包括选育抗病品种、实行轮作、避免病土转移等，但由于病毒的变异和传播途径的复杂性，这些措施的效果受到一定限制。

转录因子在植物应对生物胁迫过程中发挥着关键作用，其中NAC转录因子作为植物特有的一类转录因子，参与了植物生长发育、细胞分化以及对环境胁迫的应答等多种生物过程。研究表明，NAC转录因子能够通过与胁迫相关基因的启动子结合，调控这些基因的表达，从而增强植物对病原菌的抵抗能力。因此，深入研究与大麦黄花叶病相关的NAC转录因子，揭示其在大麦抗病过程中的作用机制，对于培育抗病大麦品种、提高大麦产量和品质具有重要的理论和实践意义。

1.2NAC转录因子概述

NAC转录因子是植物中一类重要的转录调控因子，其家族成员众多，构成了一个庞大的转录因子家族。该家族的命名源于矮牵牛的NAM（Noapicalmeristem）、拟南芥的ATAF1（Arabidopsistranscriptionactivationfactor1）、ATAF2及CUC2（Cup-shapedcotyledon2）。通过对多种植物的全基因组分析，现已确认拟南芥中有117种NAC基因、水稻151种、葡萄79种、杨树163种、大豆和烟草中各152种。

NAC转录因子最显著的结构特点是其编码蛋白的N末端具有一个高度保守的约150个氨基酸的NAC结构域，这是NAC转录因子的DNA结合结构域。典型的NAC域可被分为5个子域（A，B，C，D，E）。其中，子域A、C和D高度保守，C和D带有正电荷，包含有核定位信号，与DNA结合有关，可能还参与NAC转录因子与特定的启动子元件的识别过程；A可能参与了一个功能二聚体的形成；子域B和E比较多变，可能是NAC基因功能多样性的原因之一。例如，ANAC019的NAC域结构通过X-射线晶体学确定，其NAC域缺乏典型的螺旋—转—螺旋结构，取而代之的是一种新的转录因子折叠结构，即由几个螺旋环绕一个反向平行的β-折叠。NAC结构域不含有任何已知的结合DNA基序，但可通过一些作用如盐桥形成有功能的NAC蛋白同源或异源二聚体，此种二聚体可能与DNA的结合有关。

NAC转录因子的C末端具有高度多样性，是它的转录激活功能区，既有激活域又有抑制域，即既能激活转录又可以在一定条件下抑制基因的转录活性，是NAC因子的转录调节域。该端的共同特点是一些简单氨基酸重复出现的频率较高，同时富含丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸、谷氨酸等。

根据NAC转录因子的结构特征和功能差异，可将其分为不同的亚家族，如NAM型、ATAF型和CUC型等。NAM型转录因子在植物生长发育过程中起着关键作用，如控制分生组织形成，调控器官分化等；ATAF型主要参与ABA（脱落酸）信号转导，调控植物对环境压力的反应；CUC型主要参与植物胚胎发育过程。

NAC转录因子在植物的生长发育、器官建成、逆境胁迫以及作物的品质改良中具有重要作用。在植物生长发育方面，NAC转录因子参与调控分生组织的细胞分裂，影响茎和叶的发育，还参与侧根生长、开花、衰老等过程的调节。例如，在拟南芥中，特定的NAC转录因子可以调控细胞分裂和增殖，从而影响植物的器官大小和形态，同时也参与植物的激素