仪器分析第四章高效液相色谱分析法.pptxVIP

第一节高效液相色谱仪第三节液相色谱的固定相与流动相第二节主要分离类型第四节影响分离的因素与分离类型的选四章高效液相色谱分析法

第一节高效液相色谱仪美国安捷伦公司Agilent1200

第一节高效液相色谱仪美国戴安公司UltiMate3000

第一节高效液相色谱仪一、高效液相色谱仪结构流程二、高压输液系统三、梯度淋洗装置六、液相色谱检测器五、分离系统四、进样系统

第一节高效液相色谱仪储液瓶高压泵进样器色谱柱检测器废液一、高效液相色谱仪结构流程高压输液泵、高效分离住、高灵敏度检测器

第一节高效液相色谱仪高压输液系统（高压泵）要求：输出压力高；平稳、脉冲小；流量稳定可调；耐腐蚀。机械往复柱塞泵结构图

第一节高效液相色谱仪梯度淋洗装置在液相色谱中,可以通过改变流动相的组成、极性来改善分离和调节出峰时间。

两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定比例送入混合器，混合后进入色谱柱。高压梯度(外梯度)一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入混合器中混合。低压梯度(内梯度)第一节高效液相色谱仪

第一节高效液相色谱过改变流动相的组成来调整组分的k值，改变分离因子α值，以达到最短时间内得到最佳分离的目的。梯度洗脱梯度洗脱的特点?改善分离,加快分析速度；?改善峰形,减少拖尾;?可能引起基线漂移。

第一节高效液相色谱仪六通阀进样装置进样系统

第一节高效液相色谱仪五、分离系统（色谱柱）内径：1～6mm，柱长：5～50cm；柱填料粒径：5～10μm为保护色谱柱，通常在柱前加一支填料与色谱柱相同的保护柱。

类型01示差折光检测器02荧光检测器03电化学检测器04电导检测器05液相色谱检测器紫外检测器06第一节高效液相色谱仪

第一节高效液相色谱仪紫外检测器—应用最广泛的检测器基本原理：试样组分对特定波长的紫外光具有选择性的吸收，吸光度与试样组分浓度之间的定量关系符合郎伯-比耳定律。灵敏度高，线形范围宽；死体积小；波长可选；对流速和温度变化不敏感；可用于梯度洗脱。无紫外-可见吸收组分不响应；流动相选择受一定限制。优点：缺点：

第一节高效液相色谱仪一些常用溶剂的紫外截止波长溶剂二硫化碳氯仿四氢呋喃苯乙睛甲醇水紫外截止波长/nm380245212210190205187

第一节高效液相色谱仪可变波长紫外检测器二极管阵列检测器

第一节高效液相色谱仪两种检测器的色谱图可变波长紫外检测器；(b)：二极管阵列检测器峰纯度检验

No.1基本原理：连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光系数差值，该值与试样池流动相中的组分浓度成正比。No.2每种物质具有不同的折光指数。生命科学中各类糖类化合物，没有紫外吸收，一般要用示差折光检测器。第一节高效液相色谱仪（二）、示差折光检测器—通用型检测器

第一节高效液相色谱仪缺点：灵敏度低；对温度敏感；不能用于梯度洗脱。

基本原理：在一定的条件下，荧光强度与流动相中的组分的浓度成之比。01对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应。02第一节高效液相色谱仪（三）、荧光检测器—专用型检测器

第一节高效液相色谱仪特点：CBA高灵敏度；高选择性；可用于梯度洗脱。

01液-固吸附色谱02液-液分配与化学键合相色谱03离子交换色谱04离子对色谱05空间排阻色谱06亲和色谱第二节主要分离类型

01分离机理：流动相中的溶质分子(X)与溶剂分子(S)在固体吸附剂上竞争吸附的结果。流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。固定相：固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等。颗粒度较小，5-10μm020304第二节主要分离类型一、液-固吸附色谱

第二节主要分离类型吸附平衡常数K不等于分配系数。K值越大，保留时间越长，分配系数大。适用对象：相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性。下标M、s分别代表流动相和固定相，n代表被吸附的溶剂分子数；K代表吸附平衡常数。

0102二、液-液分配与化学键合相色谱固定相与流动相均为液体（互不相溶）。基本原理：组分在固定相和流动相上的分配。改变流动相的组成来改善分离效果。K不仅与固定相的种类有关，也与流动相的种类有关。与气相色谱中气--液色谱比较？（一）、液-液分配色谱第二节主要分离类型

第二节主要分离类型固定相极性流动相极性正相分配色谱（正相柱）组分极性越大，保留时间越长；使用极性化合物的分离。反相分配色谱（反相柱）固定相极性流动相极性组分极性越小，保留时间越长；适用非极性化合物的分离。

0102（二）、化学键合固定相色谱将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的