流式细胞仪11-FACSCanto-Clinical-四色免洗淋巴细胞亚群的绝对计数.docVIP

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FACSCantoClinical四色免洗淋巴细胞亚群的绝对计数

细胞(/μl)=

细胞(/μl)=

Beads获取数×样本量

获取细胞数×Beads总量

【主要试剂】：

抗体：CD3/CD8/CD45/CD4；CD3/CD16+56/CD45/CD19四色荧光抗体。

（2）Trucounttube（内含数量已知的Beads）。

（3）FACSLysingSolution（溶血素）（10×,使用前用蒸馏水稀释成1×）。

【实验步骤】：

取两支TruCountTube，编号A和B；

用反向加样法在Tube中加入50ul充分混匀的抗凝全血，注意血不要碰到试管底部的微球（Beads）。

取20ulCD3/CD8/CD45/CD4抗体加入到A管中、取20ulCD3/CD16+56/CD45/CD19标记的抗体加入B中，注意：不要碰到血。涡旋混匀，室温避光放置15－20min。

取出加入450ul1×FACS溶血素，充分混匀，避光放置15min。

24小时内上机用FACSCantoClinical软件获取2500个淋巴细胞进行检测，上机前应充分混匀。；

【注意事项】：

样本使用EDTA抗凝全血，室温放置，24小时内处理，处理前充分混匀。

取血时要采用反向加样法，即加样枪吸取血样时，打到第二档，放时打到第一档，保证血量的准确，减