基于单宁酸的pH响应型基因递送系统设计、制备与评价.pdfVIP

摘要

在过去的20年里，癌症是导致人类死亡的主要原因之一。采用传统策略治

疗癌症的患者通常会出现频繁的癌症复发和转移，并在治疗不久后出现严重的副

作用，而基因治疗则可以通过调控肿瘤相关基因的表达，阻断癌细胞的生长、扩

散和转移，提高传统治疗的疗效和降低副作用，还有可能帮助癌症患者个体化治

疗，根据个体基因特征设计相应的治疗方案，提高治疗的针对性和有效性。而想

要实现基因治疗的精准高效，其基因载体是至关重要的一环。基因载体是将外源

基因导入宿主细胞的工具，常用的基因载体种类包括病毒载体和非病毒载体，其

中病毒载体具有高效传递外源基因的能力，可以稳定表达基因并持续时间较久，

然而易引起宿主免疫反应，有安全性风险，且携带的基因插入位点不可控制，导

致其应用受到限制。非病毒载体则凭借相对安全性较高，易于制备和存储，且不

会引起免疫反应的优点得到人们的关注。其中聚乙烯亚胺(PEI)凭借其高效的基

因传递能力、强大的负载能力成为了基因治疗领域中备受重视的重要工具之一。

由于PEI的高毒性，使其难以进行直接利用，而量子点的合成可以降低其毒性，

增加示踪效应，只是因量子点本身体积较小，易发生团聚，负载能力有限，又易

因首过效应而被机体清除。若是利用pH响应性构建集束式载体，不仅可以增加

其粒径避免首过效应，还可在抵达肿瘤微环境后凭借其响应能力分散成更易进入

肿瘤细胞的小型载体，实现基因的高效递送。单宁酸(TA)是一种具有树枝状分子

结构的有机生物大分子，其上含有众多高活性易于修饰的酚羟基。因此，本文基

于以上思路，以单宁酸作为pH响应性核心试验构建了新的基因递送系统，并对

该系统进行了初步评价。具体工作如下：

1、为了验证pH响应性基因载体可行性。利用溴乙酰溴作为桥联分子，将

PEI30kTATA

接枝于，再利用与金属离子通过配位键和氢键相互作用形成的交

3+3+

联结构会受pH影响构建了以Al与Fe与TA为pH响应核心的基因递送系统。

采用多种方法对两种纳米复合物的粒径电位、红外光谱、氨基含量和形貌特征等

物理化学性质进行了表征。结果表明两种纳米复合物的粒径在不同pH条件下发

TEMAl-TPFe-TP

生变化，结果表明和复合物有较规则的球形和分散后的锥型

两种状态。与PEI30k相比，两种复合物的氨基含量显著下降，说明纳米复合物

合成成功。通过MTT细胞毒性实验对两种纳米复合物的生物安全性进行评价，

结果表明，两种纳米复合物对细胞的毒性总体在癌症细胞中与PEI30k没有显著

性差异，在正常细胞中总体小于PEI30k。通过琼脂糖凝胶电泳实验，体外细胞

摄入实验，体外转染实验分析了其作为基因递送系统的潜力，结果表明，两种纳

I

米复合物均保留了PEI的阳离子基因载体能力，可以成功结合DNA，保护DNA

IDNaseI

不受脱氧核糖核酸酶（）的水解，并在肝素钠置换下释放出来。同时纳

米复合物/DNA均能被Hela和293T细胞成功摄取并进入细胞核中。体外转染实

验表明，两种纳米复合物/DNA的体外转染效率均低于PEI30k/DNA。以上结果

表明，制备的纳米复合物具有pH响应能力，然而作为基因载体不甚理想。

2Al3+Fe3+TApH

、鉴于以与与为响应核心的基因递送系统效果不慎理想，

采用将不同分子量PEI制作为量子点的形式降低其毒性，同时利用TA易于修饰

pHPEIDNA

的特点，以单宁酸修饰后的席夫碱为响应核心，再以量子点负载

制成新型pH响应型基因递送系统。采用多种方法对两种纳米复合物的粒径电位、

红外光谱、荧光特性、氨基含量和形貌特征等物理化学性质进行了表征。结果表

明两种纳米复合物的粒径在不同pH条件下发生变化，TEM结果表明TPQD10k

和TPQD25k复合物有聚集的大体积的球型和分散后的小体