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2025年PCR上岗证考试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30分）

1.PCR反应中，变性步骤的典型温度是？

A.94℃

B.55℃

C.72℃

D.37℃

2.以下哪种物质可有效抑制PCR反应中的核酸酶活性？

A.EDTA

B.NaCl

C.Tris-HCl

D.SDS

3.荧光定量PCR中，Ct值的定义是？

A.扩增产物达到平台期的循环数

B.荧光信号达到设定阈值的循环数

C.引物二聚体开始形成的循环数

D.模板完全消耗的循环数

4.引物设计时，为避免引物二聚体，应重点关注引物的？

A.3’端互补性

B.5’端GC含量

C.长度

D.Tm值

5.PCR实验室中，样本处理区（第二区）的主要操作是？

A.试剂配制

B.核酸提取与纯化

C.PCR扩增

D.产物电泳分析

6.以下哪种情况会导致PCR假阴性结果？

A.扩增产物污染

B.样本中存在Taq酶抑制剂

C.引物浓度过高

D.Mg2+浓度过高

7.实时荧光PCR中，使用UNG酶（尿嘧啶DNA糖基化酶）的主要目的是？

A.提高扩增效率

B.降解含dUTP的既往扩增产物

C.增强引物特异性

D.降低退火温度

8.内参基因（如β-actin）在PCR检测中的核心作用是？

A.验证样本核酸提取质量

B.提高目标基因扩增效率

C.减少引物二聚体

D.降低Ct值变异系数

9.PCR反应体系中，dNTP的最佳浓度范围通常为？

A.0.01-0.1mmol/L

B.0.1-0.5mmol/L

C.1-5mmol/L

D.5-10mmol/L

10.以下哪种污染类型是PCR实验室最常见的交叉污染来源？

A.样本间交叉污染

B.气溶胶污染

C.试剂污染

D.设备残留污染

11.荧光定量PCR的标准曲线斜率反映的是？

A.扩增效率

B.检测灵敏度

C.特异性

D.重复性

12.核酸提取过程中，使用乙醇洗涤的主要目的是？

A.裂解细胞

B.沉淀核酸

C.去除盐离子和杂质

D.灭活核酸酶

13.PCR扩增仪的温度均匀性应控制在？

A.±0.1℃

B.±0.5℃

C.±1.0℃

D.±2.0℃

14.检测结果为“阴性”时，需同时满足的条件是？

A.目标基因无扩增，内参基因正常扩增

B.目标基因无扩增，阴性对照无扩增

C.内参基因正常扩增，阳性对照正常扩增

D.目标基因无扩增，内参基因正常扩增，阴性对照无扩增

15.以下哪种情况无需重新检测？

A.阳性对照无扩增

B.内参基因扩增失败

C.样本Ct值在有效检测范围内且重复性良好

D.阴性对照出现扩增曲线

二、多项选择题（每题3分，共15分，多选、少选、错选均不得分）

1.影响PCR扩增效率的主要因素包括？

A.模板核酸的质量与浓度

B.引物的特异性与浓度

C.Mg2+离子浓度

D.退火温度与时间

2.PCR实验室分区应包括？

A.试剂准备区（第一区）

B.样本处理区（第二区）

C.扩增区（第三区）

D.产物分析区（第四区）

3.阳性对照在PCR检测中的作用包括？

A.验证扩增体系的有效性

B.监测实验过程中的污染

C.评估检测方法的灵敏度

D.替代内参基因

4.核酸提取过程中可能导致产量降低的原因有？

A.样本裂解不充分

B.离心速度或时间不足

C.洗涤液残留过多

D.洗脱缓冲液pH不适

5.实时荧光PCR结果判读时，需重点关注的参数包括？

A.Ct值

B.扩增曲线形态

C.熔解曲线峰型

D.阴性对照的Ct值

三、判断题（每题2分，共20分，正确填“√”，错误填“×”）

1.PCR实验室可以不设置缓冲间，仅通过分区标识区分区域。（）

2.扩增产物分析区（第四区）可使用开放式离心机，无需专用。（）

3.同一批检测中，若阳性对照无扩增，所有样本结果均无效。（）

4.核酸提取时，加入蛋白酶K的目的是裂解细胞膜。（）

5.荧光定量PCR中，熔解曲线出现双峰可能提示引物二聚体或非特异性扩增。（）

6.为提高检测灵敏度，可随意降低荧光阈值设置。（）

7.样本处理区（第二区）应配备生物安全柜，避免气溶胶扩散。（