基于双重“RT-LAMP-金磁微粒层析法”流感病毒检测技术的建立.pdfVIP

摘要

便捷、快速、高效的病原微生物核酸检测技术对于疾病的早期筛查、诊断及预后

监测具有一定的临床意义。目前针对病原微生物的核酸检测方法包括荧光PCR、基因

芯片、测序等，这些检测方法具有自动化程度高、通量大等优点，但将其用于基层医

疗机构的检测，存在设备昂贵、检测流程复杂、对操作人员的技术水平要求高等限制。

因此针对病原微生物开发便捷、快速、高效的核酸诊断平台，对于疾病的筛查和患者

的分级分类诊疗具有重要意义。

本研究内容包括三个部分：首先，以硅羟基磁珠为核心材料，通过优化影响病毒

RNA提取的关键因素，研究了RNA病毒核酸快速富集纯化方法，对方法学的线性范围、

精密度和灵敏度进行了测定，同时与现有的磁珠法核酸提取试剂盒进行对比研究。该

方法可在20min完成提取，扩增后Ct值比现有磁珠法核酸提取试剂盒低1~2，线性范

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围为10copies/mL至10copies/mL，R=0.9975，变异系数（CV%）为1.2%，灵敏度

为100copies/mL；其次，以纳米金磁微粒为载体结合环介导等温扩增技术（LAMP），

以流感病毒中的甲流（FluA）和乙流（FluB）为检测目标，内参基因RNaseP为质控

体系，建立了双重“RT-LAMP-金磁微粒层析法”甲乙流检测技术，通过质控品评估了

甲乙流双重检测方法的性能，检测方法的灵敏度达80copies/mL，特异性良好，可在35

min内完成检测；最后，以甲乙流阴性和阳性样本对所建立的双重“RT-LAMP-金磁微

粒层析法”甲乙流检测技术进行了初步验证，并以RT-PCR荧光法为对照，经统计符合

率达到100%。

本研究以硅羟基磁珠为核心材料，建立了病毒RNA病毒核酸提取方法，该方法快

速便捷，回收率高，具有较高的临床应用价值；并以纳米金磁微粒为载体结合环介导

等温扩增技术（LAMP）建立了双重“RT-LAMP-金磁微粒层析法”甲乙流检测技术，

结合性能评估及临床样本的验证，所建立的方法具备操作便捷、快速高效灵敏的特性，

具有一定临床应用价值，为分级诊疗检测技术提供一种新选择，具有一定社会意义及

应用前景。

关键词：磁珠法病毒RNA核酸提取，双重“RT-LAMP”，金磁微粒层析法，流感病毒

ABSTRACT

Theconvenient,rapidandefficientnucleicaciddetectiontechnologyofpathogenic

microorganismshascertainclinicalsignificancefortheearlyscreening,diagnosisand

prognosticmonitoringofdiseases.Currently,thedetectionmethodsusedinpathogenic

microorganismsincludefluorescentqPCR(RT-PCR),Genechip,sequencing,etc.These

detectionmethodshavetheadvantagesofhighautomationandhighthroughput,butthereare

somelimitationssuchasexpensiveequipment,complexdetectionprocessandhigh

requirementsonthetechnicallevelofoperatorswhentheyareusedinthedetectionofbasic

medicalunits.Therefore,thedevelopmentofconvenient,rapidandefficientnucleicacid

diagnosisplatformforpathogenicmicroorganismshavegreat