第21章毛细管电泳与电色谱.pptVIP

毛细管凝胶电泳分离原理一些生物大分子如DNA和被SDS饱和的蛋白质分子，其电荷/质量之比与分子大小无关，电泳淌度几乎相同，用CZE模式很难分离。在含有筛分介质的毛细管中，这些分子在电场作用下电泳，受到的阻力不同，迁移速度有差异。第62页，共88页，星期日，2025年，2月5日毛细管电泳分离第30页，共88页，星期日，2025年，2月5日(二)分离柱效与分离度柱效率（Efficiency)选择性(Selectivity)分离度(Resolution)第31页，共88页，星期日，2025年，2月5日(1)柱效理论塔板数（Giddings的定义）假设分子扩散为峰扩展的唯一因素，由Einstein扩散定律D为扩散系数；t为迁移时间第32页，共88页，星期日，2025年，2月5日(1)柱效毛细管电泳的柱效方程：提高分离电压V，有利于提高理论塔板数l/L值越大，理论塔板数越大当电泳与电渗同向时，电泳迁移率越大，理论塔板数越大第33页，共88页，星期日，2025年，2月5日(2)选择性第34页，共88页，星期日，2025年，2月5日（3）分离度第35页，共88页，星期日，2025年，2月5日（三）引起峰展宽的因素实际上，N理论N实测（因理论值只考虑分子扩散）其它因素：由进样引起的峰加宽。焦耳热和温度梯度引起的峰加宽。由溶质与管壁间的相互作用引起的峰加宽。电分散:样品与缓冲溶液间电场强度、淌度差异。由其它因素引起的峰加宽，如压差引起的抛物线流。第36页，共88页，星期日，2025年，2月5日三、毛细管区带电泳外加电压毛细管电泳柱缓冲溶液缓冲溶液添加剂应用例第37页，共88页，星期日，2025年，2月5日（1）外加电压柱效N（N-V）分离度Rs（Rs--V1/2)分析速度(t--1/V)焦耳热(Q--E2)第38页，共88页，星期日，2025年，2月5日不同浓度缓冲溶液下N-V关系样品：丹酰化丙氨酸50cm?75?m乙酸盐溶液（pH5)1.25mmol/L2.37.5mmol/L3.50mmol/L4.75mmol/L5.100mmol/L第39页，共88页，星期日，2025年，2月5日不同浓度缓冲溶液下的Rs-V关系样品：丹酰化丙氨酸丹酰化蛋氨酸第40页，共88页，星期日，2025年，2月5日（2）毛细管电泳柱石英毛细管内径：25-100?m(50?m;75?m)外径：300?m控制电渗流和消除内壁对试样的吸附内壁表面的化学改性缓冲溶液中添加改性剂第41页，共88页，星期日，2025年，2月5日（3）缓冲溶液缓冲溶液的类型、浓度（离子强度）、pH是CZE分离条件选择的重要考虑因素电渗流分离速度分离选择性分离度第42页，共88页，星期日，2025年，2月5日缓冲溶液的选择无严格规律可循。要满足一些基本条件:有一定的pH调节范围和足够的缓冲容量.尽可能选择浓度高而产生电流小的缓冲溶液.缓冲溶液的表观淌度接近样品组分的表观淌度.对某些样品如多元醇、糖等，可选择有络合能力的缓冲溶液，如硼酸盐缓冲溶液。第43页，共88页，星期日，2025年，2月5日缓冲溶液的pH提高缓冲溶液的pH,使电渗流增加，缩短分析时间。改变缓冲溶液的pH,可改变某些组分的带电性质和数量，使淌度发生变化，提高选择性。第44页，共88页，星期日，2025年，2月5日缓冲溶液的离子强度（浓度）离子强度（浓度）的变化，引起溶液粘度、扩散系数以及zeta电势的变化，从而影响分离效率和分离度。第45页，共88页，星期日，2025年，2月5日（4）缓冲溶液添加剂改善分离效率和分离选择性表面活性剂有机溶剂中性盐类手性选择剂第46页，共88页，星期日，2025年，2月5日例：表面活性剂表面活性剂：亲水端和疏水端通过亲水端或疏水端与样品组分作用，影响组分的电泳性质，从而改变体系的分离选择性。与毛细管内壁作用，减小内壁的吸附作用，或改变电渗流的大小和方向。第47页，共88页，星期日，2025年，2月5日电渗流反向第48页，共88页，星期日，2025年，2月5日（5）毛细管区带电泳应用例饮料中酸的分离分析第49页，共88页，星期日，2025年，2月5日（5）毛细管区带电泳应用例聚乙烯醇分离蛋白质第50页，共88页，星期日，2025年，2月5日四、胶束电动色谱MicellarElectroki