DB23T 2356-2019 树莓秋福组培快繁技术规程.docxVIP

ICS65.020.01B64

DB23

黑龙江省地方标准

DB23/T2356—2019

树莓秋福组培快繁技术规程

2019-04-03发布2019-05-02实施

黑龙江省市场监督管理局发布

DB23/T2356—2019

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前言

本标准依据GB/T1.1-2009的编写规则起草。

本标准由黑龙江省森林工业总局提出。

本标准起草单位：黑龙江省林业科学研究所、黑龙江省森林环境研究所、黑龙江省林业科学院、苇河林业局。

本标准主要起草人：李艳霞、丛喜东、田新华、闫朝福、刘洪志、韩瑞雪、王福德、刘建明、刘忠玲、姚颖等。

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树莓秋福组培快繁技术规程

1范围

本标准规定了树莓(RubusidaeusL.)秋福（AutumnBliss）组培快繁技术的培养基制备、外植体选择与处理、诱导分化和增殖、生根培养、炼苗移栽及技术档案。

本标准适用于树莓秋福组培快繁技术。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

LY/T1882林木组织培养育苗技术规程

3培养基制备

3.1培养基

不定芽分化诱导培养基：MS+6-BA0.5mg/L+GA30.2mg/L+IBA0.1mg/L+琼脂6.0g/L+蔗糖20g/L，pH5.8。

增殖培养基：MS+6-BA1.0mg/L+GA30.5mg/L+IBA0.1mg/L+琼脂6.0g/L+蔗糖20g/L，pH5.8。

生根培养基培养：1/2MS+IBA0.5mg/L。

3.2培养基灭菌

瓶装培养基需在10h内完成灭菌，采用高压蒸汽灭菌锅灭菌，在压力0.105MPa、温度121℃条件下灭菌20min～25min。

3.3培养基保存

灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下7d内使用，2℃~4℃条件下14d内使用。培养基应保存于洁净环境中，注意避光和防尘。

4外植体选择与处理

4.1外植体的选择

选择生长健壮的植株作为采样母株，剪取母树当年幼枝茎段作为外植体，外植体大小在2cm～3cm之间。

4.2外植体灭菌

先将外植体用洗涤剂作表面清洗，再将外植体用流水冲洗30min后，放入消毒瓶中。把装有外植体的消毒瓶用75%的酒精棉擦拭后放入超净工作台，在超净工作台上打开装有外植体的消毒瓶，倒入75%酒精并摇晃消毒瓶，浸泡消毒30s，倒去酒精，用无菌水冲洗外植体3次～5次；然后用0.1%HgCl2浸泡8min，无菌水冲洗3次～5次，并浸泡30min，再用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。

4.3外植体切割

将表面消毒后的外植体切割，接入培养基中。茎段在接种前用手术剪刀剪去两端，切成长1.0cm~2.0cm。

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5诱导分化和增殖

5.1诱导分化

先将培养瓶的封口膜轻轻取下，放在一边，将培养瓶口倾斜在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒。将枪式镊子在酒精灯上灼烧消毒并冷却后，将切割好的外植体放入不定芽分化诱导培养基中，每个培养瓶放3个外植体，接种后盖上封口膜，并标注日期。培养室的温度控制在25℃±3℃,相对空气湿度控制在70%～80%，光照强度为27μmol?m-2?s-1～36μmol?m-2?s-1，光照时间为12h/d。培养20d～25d。

5.2增殖

外植体经诱导分化培养生成愈伤组织及不定芽，将其转接至增殖培养基中，继代培养30d～35d，培养条件同5.1。

6生根培养

选取培养瓶中长度1.5cm～3.0cm生长健壮的不定芽接种至生根培养基中，培养20d～30d，培养条件同5.1。

7炼苗移栽

7.1炼苗

7.1.1炼苗标准

当组培苗基部长出3条以上，根长达1.0cm～3.0cm，即可进行炼苗处理。

7.1.2炼苗方法

将组培苗转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在20℃~25℃,空气相对湿度在70%～80%，每天中午在培养瓶周围喷洒雾水。3d后揭去封口膜，2d～4d后即可移栽。

7.2移栽

取出组培苗，用清水洗去苗基部的培养基，移栽至装有腐殖土、草碳土和细河沙（混合比例为2：1：1）的混合基质的育苗盘中。育苗盘规格为35cm×50cm，育苗盘四壁高度不应低于7cm，育苗基质放入育苗容器并浇透水后，厚度不应小于5cm，水渗干后再覆上一层土。

温室应保持70%～80%的空气湿度，温度应在18℃~25℃,