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革兰染色标准操作规程

1、目的

???规范革兰染色操作。

2、原理

???细菌样本先经结晶紫草酸盐复合物染色，之后用LugolPVP媒染剂处理以促进染料与革兰阳性菌结合。经乙醇的脱色作用，革兰阴性菌中的结晶紫会被洗脱。番红作为复染剂：革兰阴性菌呈现粉红色，而革兰阳性菌呈现紫色。

3、试剂

3.1结晶紫草酸盐溶液：结晶紫2%、乙醇20%、草酸铵0.8%。

3.2稳定LugolPVP复合物：碘1.3%、碘化钾2%、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)10%。

3.3脱色剂：95%乙醇50%、丙酮50%。

3.4番红溶液：番红精0.25%、95%乙醇10%。

4、质量控制

????大肠埃希菌ATCC25922质控标准菌株、金黄色葡萄球菌ATCC25923质控标准菌株，每周1次及更换染液批号时质控，有室内质控记录。

5、操作步骤

????初染：第一液初染剂(结晶紫)染色10s，水洗。

????媒染：第二液媒染剂(碘液)染色10s，水洗。

????脱色：第三液脱色剂(95%乙醇)脱到无紫色脱落为止，水洗10~20s。

????复染：第四液复染剂(石炭酸复红或沙黄)染色10s，水洗。

???自然干燥后镜检。

6、结果判断

????金黄色葡萄球菌呈紫色，大肠埃希菌呈红色。

7、用途

7.1鉴别细菌：可将细菌分为阳性和阴性两大类，因而可以初步识别细菌，缩小范围，有利于进一步鉴定。

7.2选择药物：革兰阳性菌与阴性菌的细胞壁结构有很大差别，因而抗菌药物有差异。

8、注意事项

8.1染色的结果常受操作者技术影响，尤其是容易过度脱色，往往阳性染成阴性。

8.2在同一载玻片上，需用已知金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌做阳性及阴性对照。

8.3菌龄以18~24h为佳。