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基于质膜蛋白质组学解析水杨酸与茉莉酸甲酯诱导水稻抗病反应的分子机制

一、引言

1.1研究背景

水稻（OryzasativaL.）作为全球重要的粮食作物之一，为超过半数的世界人口提供主食。然而，水稻在生长过程中面临着多种病害的威胁，其中稻瘟病是由丝状子囊真菌Magnaportheoryzae侵染引起，是水稻最为严重的病害之一，素有植物十大真菌病害之首的恶名。多年的田间调查数据显示，在温度处于24℃-26℃及以下时，稻瘟病极易流行，一旦爆发，可致使水稻大幅度减产，严重时减产幅度可达40-50%，甚至颗粒无收。在我国，稻瘟病的危害也不容小觑，例如在四川地区，由于病原菌群体不断产生新的致病性变异，导致先后推广的高抗品种丧失抗性，进而引发了1984-1985年、1990-1993年两次稻瘟病流行高峰，对当地水稻生产造成了极大冲击。

为了有效防控稻瘟病，增强水稻自身抗病性成为了研究的重点方向。水杨酸（Salicylicacid，SA）和茉莉酸甲酯（Methyljasmonate，MeJA）作为重要的外源信号分子，已被大量研究证实可以诱导水稻的抗瘟性。SA参与植物的多种生理生化过程，如蒸腾、种子萌发、开花、结实等，其诱导植物抗病的机制主要在于，植物体内水杨酸受体蛋白基因与过氧化物酶基因高度同源，外源SA进入体内后，可直接激活许多与抗性有关的酶系统活性；同时，SA还参与植物体内茉莉酸代谢调节，进而增强植物对多种胁迫的抗逆能力。有研究表明，SA能显著提高超氧化物歧化酶（SOD）的活性，抑制过氧化氢酶（CAT）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性，促使植物体内H?O?大量生成，H?O?不仅能诱导植物细胞过敏性坏死反应，对微生物有直接的毒性，还参与细胞壁蛋白（如富经糖蛋白）的氧化交联和木质素的形成，加固细胞壁，阻止微生物进一步侵染。而MeJA同样在植物生长发育和防御反应中发挥着关键作用，在温暖环境下，施用茉莉酸甲酯能够有效提高水稻对稻瘟病的基础抗性水平，抑制稻瘟病的发生。

细胞质膜作为细胞与外界环境的屏障，在感受及传递外界信号等过程中起着不可或缺的作用。质膜上的蛋白质参与了细胞的物质运输、信号转导、能量转换等多种重要生理功能，在植物抵御病原物侵染的防卫反应信号传导途径中扮演着关键角色。近年来，质膜蛋白质组学研究受到广泛关注，其为从亚细胞蛋白质组学角度深入了解SA和MeJA诱导的水稻抗病性机制提供了新的思路和技术平台。通过对质膜蛋白质组的分析，能够揭示在SA和MeJA诱导下，水稻叶片质膜蛋白质的差异表达情况，进而深入探究水稻抗病的分子机制。

1.2研究目的与意义

本研究旨在利用质膜蛋白质组学技术，系统分析水杨酸与茉莉酸甲酯诱导水稻叶片质膜蛋白质的差异表达情况。通过对不同处理时间下水稻叶片质膜蛋白质的双向电泳分离、图像分析以及质谱鉴定，筛选出差异表达的蛋白质，并对其功能进行生物信息学分析。

本研究具有重要的理论意义和实践价值。在理论方面，深入探究SA和MeJA诱导的水稻叶片质膜蛋白质差异表达，有助于揭示水稻抗病的分子机制，丰富植物抗病信号传导理论。目前对于SA和MeJA所诱导的水稻抗瘟性的早期反应机制仍缺乏系统的了解和认识，本研究将填补这一领域的部分空白，为后续深入研究水稻与病原菌互作的分子机理提供重要参考。在实践方面，研究结果可为水稻抗病品种的选育提供理论依据，通过明确参与水稻抗病反应的关键蛋白质，可为分子标记辅助育种提供新的靶点，加速抗病品种的培育进程，从而有效提高水稻的抗病能力，减少稻瘟病等病害对水稻产量和品质的影响，保障全球粮食安全。

二、材料与方法

2.1实验材料

本实验选用近等基因系水稻C101LAC（含Pi-1抗稻瘟病基因）和C039（感病对照，不含已知抗稻瘟病基因）作为实验材料，种子由[具体来源]提供。实验所用的水杨酸（分析纯，纯度≥99%）购自[试剂供应商1]，茉莉酸甲酯（分析纯，纯度≥95%）购自[试剂供应商2]。

2.2实验方法

2.2.1水稻培养与处理

将水稻种子用5%次氯酸钠溶液消毒15min，然后用蒸馏水冲洗3-5次，直至洗净种子表面的次氯酸钠残留。将消毒后的种子置于湿润的滤纸上，在28℃恒温培养箱中催芽24h。待种子露白后，选取露白一致的种子播种于装有水稻专用营养液（pH5.5-6.0）的塑料盆（规格为15cm×15cm×15cm）中，每盆播种20粒，置于人工气候箱中培养。培养条件为：光照强度300μmol?m?2?s?1，光照时间14h/d，温度28℃/25℃（昼/夜），相对湿度70%-80%。在水稻生长至三叶一心期时，进行如下处理：

水杨酸