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2025年核酸检测方法试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.以下哪种核酸检测技术属于等温扩增方法？

A.聚合酶链式反应（PCR）

B.环介导等温扩增（LAMP）

C.实时荧光定量PCR（qPCR）

D.数字PCR（dPCR）

2.在反转录PCR（RT-PCR）中，关键酶的作用是？

A.将DNA转录为RNA

B.将RNA反转录为cDNA

C.将双链DNA解旋为单链

D.催化dNTP连接形成DNA链

3.衡量核酸检测方法特异性的核心指标是？

A.最低检测限（LOD）

B.交叉反应率

C.扩增效率

D.重复性变异系数（CV）

4.核酸提取过程中，胍盐（如异硫氰酸胍）的主要作用是？

A.破坏细胞膜并抑制核酸酶活性

B.沉淀蛋白质

C.结合核酸并吸附于硅胶柱

D.中和溶液pH值

5.实时荧光定量PCR中，Ct值（循环阈值）与初始模板量的关系是？

A.Ct值越大，初始模板量越多

B.Ct值越小，初始模板量越多

C.Ct值与初始模板量无关

D.Ct值仅反映扩增效率

6.以下哪种样本处理方式会显著影响核酸检测结果？

A.咽拭子采集后立即置于病毒保存液中

B.全血样本在4℃保存超过72小时

C.痰液样本经蛋白酶K消化处理

D.组织样本冷冻研磨后提取核酸

7.数字PCR的核心优势是？

A.可实现绝对定量

B.检测速度更快

C.无需引物设计

D.对抑制剂耐受性更强

8.环介导等温扩增（LAMP）的引物设计需要识别靶序列的几个区域？

A.2个

B.4个

C.6个

D.8个

9.核酸检测实验室中，扩增区（二区）与产物分析区（三区）的压力梯度应满足？

A.二区压力＞三区压力

B.二区压力＜三区压力

C.二区与三区压力相等

D.无特殊压力要求

10.用于评价核酸检测方法灵敏度的常用指标是？

A.诊断特异性（DSp）

B.诊断敏感性（DSe）

C.阳性预测值（PPV）

D.阴性预测值（NPV）

11.以下哪种技术可同时检测多个靶标（多重检测）？

A.实时荧光PCR（探针法）

B.普通PCR（琼脂糖电泳法）

C.核酸杂交（斑点杂交）

D.原位PCR

12.核酸提取过程中，75%乙醇洗涤的主要目的是？

A.洗脱核酸

B.去除蛋白质杂质

C.去除盐离子

D.灭活残留核酸酶

13.在新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测中，选择ORF1ab和N基因作为靶标的主要原因是？

A.基因序列保守性高

B.基因长度更短

C.表达量更低

D.突变频率更高

14.以下哪种情况会导致qPCR扩增曲线出现“平台期提前”？

A.模板浓度过低

B.引物二聚体过多

C.扩增效率过高（＞105%）

D.探针标记荧光基团淬灭

15.核酸检测室内质控样本的选择应满足？

A.与待测样本来源完全一致

B.包含弱阳性、强阳性和阴性样本

C.仅需设置阳性对照

D.使用第三方标准品替代

16.微流控芯片核酸检测技术的核心优势是？

A.可实现高通量检测

B.无需核酸提取步骤

C.设备成本低

D.对操作人员技术要求低

17.以下哪种核酸扩增技术不需要热循环仪？

A.链置换扩增（SDA）

B.巢式PCR（nestedPCR）

C.降落PCR（touchdownPCR）

D.逆转录PCR（RT-PCR）

18.核酸检测结果判读时，“灰区”样本的处理原则是？

A.直接判定为阳性

B.直接判定为阴性

C.重新采样并重复检测

D.无需处理

19.用于RNA病毒检测的核酸提取试剂中，必须包含的成分是？

A.DNA酶（DNase）

B.RNA酶抑制剂（RNaseinhibitor）

C.蛋白酶K

D.十二烷基硫酸钠（SDS）

20.以下哪种质量控制措施可有效避免扩增产物污染？

A.使用带滤芯吸头

B.增加模板上样量

C.延长退火时间

D.提高引物浓度

二、填空题（每空1分，共20分）

1.核酸检测的基本流程包括样本采集、样本处理、________、扩增反应、________和结果判读。

2.实时荧光定量PCR的荧光信号采集方式分为________（如SYBRGreenI）和_______