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靶向PDGFr-α的RNA干扰对视网膜色素上皮细胞增殖与凋亡的调控机制探究

一、引言

1.1研究背景

视网膜疾病是一类严重威胁人类视力健康的疾病，常见的如年龄相关性黄斑变性（AMD）、糖尿病视网膜病变（DR）、视网膜色素变性（RP）等，这些疾病的发病率随着人口老龄化和生活方式的改变而逐渐上升，给患者的生活质量带来了极大的影响。视网膜色素上皮（RPE）细胞作为视网膜的重要组成部分，位于视网膜神经上皮层和脉络膜之间，具有多种复杂且关键的生理生化功能，对维持视网膜的正常结构和功能起着不可或缺的作用。它不仅为视网膜感光细胞提供营养支持，促进感光细胞的存活，还参与视觉信号传递，维持视网膜微环境的稳定，同时具有抗氧化和吞噬视细胞脱落外节盘膜等功能。一旦RPE细胞的结构或功能出现异常，就可能引发一系列视网膜疾病。例如在AMD患者中，RPE细胞的功能障碍是其主要发病机制之一，表现为RPE细胞的氧化应激、炎症反应和凋亡等方面存在显著变化；在RP这种遗传性视网膜退行性疾病中，RPE细胞的异常代谢、氧化应激和凋亡等因素导致视网膜逐渐退化。

RNA干扰（RNAi）技术是一种在真核生物体中广泛存在的通过双链RNA分子在mRNA水平上诱导特异性序列基因部分表达或完全抑制的过程。它是研究基因功能、新基因筛选、基因治疗和寻找药物靶点的重要工具。RNAi的作用机制是，首先双链RNA（dsRNA）在具有RNaseⅢ样活性的dsRNA特异性核酸内切酶（Dicer）作用下，被切割成21-23nt的具有双链结构的小干扰RNA（siRNA）。这些siRNA与一种称为RNA诱导沉默复合物（RISC）的蛋白结合，在ATP的作用下siRNA双链结构解旋并诱导形成有活性的RISC。有活性的沉默复合物通过碱基配对定位到同源mRNA上，并在距离siRNA3端的12个碱基的位置切割mRNA，实现降解目的mRNA的作用，从而在转录后水平抑制目标基因的表达。由于其高度特异性、高效性以及稳定性等特点，RNAi技术在肿瘤基因治疗研究中得到了广泛的应用，在视网膜疾病的治疗研究领域也展现出了巨大的潜力，为视网膜疾病的治疗开辟了新的途径。

血小板源性生长因子受体α（PDGFr-α）属于受体酪氨酸激酶家族，在细胞的增殖、分化、迁移和存活等过程中发挥着关键作用。在视网膜相关疾病中，PDGFr-α也扮演着重要角色。研究表明，在增生性玻璃体视网膜病变（PVR）中，PDGFr-α的表达异常升高，其信号通路的激活促进了视网膜色素上皮细胞的增殖和迁移，导致纤维瘢痕组织的形成，进而引发视网膜脱离等严重病变；在糖尿病视网膜病变中，高糖环境可诱导PDGFr-α的表达上调，通过一系列信号转导途径，促使视网膜血管内皮细胞增殖、迁移，破坏血-视网膜屏障，导致视网膜新生血管形成和黄斑水肿等病理改变。因此，调控PDGFr-α的表达可能成为治疗视网膜疾病的一个潜在靶点。

1.2研究目的与意义

本研究旨在探究靶向PDGFr-α的RNA干扰对体外视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡的影响。通过深入研究这一过程，一方面可以从细胞和分子水平揭示PDGFr-α在视网膜色素上皮细胞生理病理过程中的作用机制，丰富我们对视网膜疾病发病机制的认识，为进一步理解视网膜疾病的发生发展提供理论依据；另一方面，有望为视网膜疾病的治疗提供新的靶点和治疗策略，为开发基于RNA干扰技术的视网膜疾病治疗方法奠定实验基础，具有重要的理论意义和潜在的临床应用价值。

1.3研究创新点

在实验方法上，本研究将采用最新优化的RNA干扰技术，精准地靶向PDGFr-α基因，相较于传统方法，能更高效、更特异性地抑制基因表达，减少脱靶效应。在研究视角方面，综合运用细胞生物学、分子生物学等多学科技术手段，全面分析RNA干扰对视网膜色素上皮细胞增殖、凋亡相关信号通路及关键分子表达的影响，突破以往单一角度研究的局限性，从整体上更深入地解析其作用机制，为视网膜疾病治疗机制的研究提供全新的思路和视角，突出研究的独特价值。

二、相关理论基础

2.1视网膜色素上皮细胞概述

2.1.1结构与功能

视网膜色素上皮（RPE）细胞位于视网膜神经上皮层和脉络膜之间，是一层紧密排列的单层立方上皮细胞。从细胞结构上看，RPE细胞具有极性，其顶部与光感受器外节紧密接触，通过微绒毛包绕光感受器外节，形成一种特殊的结构关系，这种紧密接触有利于两者之间的物质交换和代谢产物的清除。细胞的基底部则与脉络膜的Bruch膜相连，Bruch膜主要由内胶原层、弹力纤维层和外胶原层组成，为RPE细胞提供了结构支撑和物质交换的界面，RPE细