第二章固液分离和细胞破碎案例.pptVIP

第二章固液分离和细胞破碎;目的;第一节发酵液的预处理;微生物发酵液的特性为：

发酵产物浓度较低，大多为1-10%，悬浮液中大部分是水；

悬浮物颗粒小，相对密度与液相相差不大；

固体粒子可压缩性大；

液相粘度大，大多为非牛顿型流体；

性质不稳定，随时间变化，如易受空气氧化、微生物污染、蛋白酶水解等作用的影响。;预处理的目的;发酵液预处理的方法：

加热法

调整pH

凝聚与絮凝

使用惰性助滤剂

加入反应剂;1.加热法

最简单和价廉的预处理方法，即将悬浮液加热到所需温度并保温适当时间。

可有效降低悬浮液的黏度，并加速聚集作用以去除某些杂蛋白；降低悬浮液的最终体积，;2.调整pH

pH值直接影响发酵液中某些物质的电离度和电荷性质，适当调节pH值可改善其过滤特性。在膜过滤中，发酵液中的大分子物质易与膜发生吸附，通过调整pH值改变易吸附分子的电荷性质，即可减少堵塞和污染；细胞、细胞碎片及某些胶体物质等在某个pH值下也可能趋于絮凝而成为较大颗粒，有利于过滤的进行。;3.凝聚与絮凝

采用凝聚和絮凝技术能有效改变细胞、细胞碎片及溶解大分子物质的分散状态，使其聚结成较大的颗粒，便于提高过滤速率。另外，还能有效地除去杂蛋白和固体杂质，提高滤液质量。

凝聚——指在投加的化学物质（如铝、铁的盐类或石灰等）作用下，胶体脱稳并使粒子相互聚集成1mm大小块状凝聚体的过程。

絮凝——指在某些高分子絮凝剂存在下，基于桥架作用，使胶体颗粒交联成网，形成10mm大小絮凝团的过程。;（1）凝聚

发酵液中的细胞、菌体或蛋白质等胶体粒子双电层的结构使胶粒之间不易聚集而保持稳定的分散状态。

阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序为：

Al3+Fe3+H+Ca2+Mg2+K+Na+Li+

常用的凝聚剂电解质有：

硫酸铝Al2(SO4)3?18H2O(明矾)

氯化铝AlCl3?6H2O

三氯化铁FeCl3

硫酸亚铁FeSO4·7H2O

石灰；ZnSO4；MgCO3;（2）絮凝

絮凝剂是一种能溶于水的高分子聚合物，其相对分子质量可高达数万至一千万以上，长链状结构，其链节上含有许多活性官能团，包括带电???的阴离子（如---COOH）或阳离子（如---NH2）基团以及不带电荷的非离子型基团。

它们通过静电引力、范德华引力或氢键的作用，强烈地吸附在胶粒的表面。

当一个高分子聚合物的许多链节分别吸附在不同的胶粒表面上，产生桥架联结时，就形成了较大的絮团，这就是絮凝作用。;1）有机高分子聚合物，如聚丙烯酰胺类衍生物、聚苯乙烯类衍生物；

2）无机高分子聚合物，如聚合铝盐、聚合铁盐等；

3）天然有机高分子絮凝剂，如聚糖类胶粘物、海藻酸钠、明胶、骨胶、壳多糖、脱乙酰壳多糖等。;聚丙烯酰胺类絮凝剂的优点;对于带负电荷的菌体或蛋白质来说，采用阳离子型高分子絮凝剂同时具有降低胶粒双电层电位和产生吸附桥架的双重机理；

对于非离子型和阴离子型高分子絮凝剂，要采用凝聚和絮凝双重机理才能提高过滤效果，这种包括凝聚和絮凝机理的过程，称为混凝。;4.加入助滤剂

一种不可压缩的多孔微粒，它能使滤饼疏松，滤速增大。悬浮液中大量的细微胶体粒子被吸附到助滤剂的表面上，改变了滤饼结构，降低了过滤阻力。

常用的助滤剂有：硅藻土、纤维素、石棉粉、白土、炭粒、淀粉等，最常用的是硅藻土。

使用硅藻土时，通常细粒用量为500g/m3；中等粒度用量为700g/m3；粗粒用量为700-1000g/m3。;5.加入反应剂

加入反应剂和某些可溶性盐类发生反应生成不溶性沉淀，如CaSO4，AlPO4等。生成的沉淀能防止菌丝体粘结，使菌丝具有块状结构，沉淀本身可作为助滤剂，且能使胶状物和悬浮物凝固，改善过滤性能。

如发酵液中含有不溶性多糖物质，用酶将其转化为单糖，以提高过滤速率；

如万古霉素用淀粉作培养基，发酵液过滤前加入0.025%的淀粉酶，搅拌30min后，再加2.5%硅藻土助滤剂，可提高过滤效率5倍。;发酵液中的杂质;(一)高价无机离子的去除方法;(二)杂蛋白的去除方法;1)酸碱调节，使蛋白质与盐或离子形成沉淀。

在酸性溶液中，蛋白质与一些阴离子，如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐等形成沉淀；

在碱性溶液中，蛋白质与一些阳离子，如Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+和Pb2+等形成沉淀。;2.变性法;加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白质而除去。

例如：

在四环素类抗生素中，采用黄血盐和硫酸锌的协同作用生成亚铁氰化锌钾的胶状沉淀来吸附蛋白质；

在枯草杆菌发酵液中，加入氯化钙和磷酸氢二钠，两者生成庞大的凝胶，把蛋白质、菌体及其他不溶性粒子吸附并包裹