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大花金鸡菊花抑菌活性物质研究

摘要

本研究旨在探究大花金鸡菊花中的抑菌活性物质。通过乙醇回流提取大花金鸡菊花，利用多种溶剂进行萃取，并采用菌丝生长速率法测定提取物及各萃取部位对多种植物病原真菌的抑菌活性。结果表明，大花金鸡菊乙醇提取物对小麦赤霉病菌、苹果斑点落叶病菌等多种病菌具有抑制作用，其中正己烷萃取物和水层萃取物抑菌活性较高。进一步对活性较高的萃取物进行分离鉴定，有望明确其抑菌活性成分，为大花金鸡菊的综合开发利用提供科学依据。

关键词

大花金鸡菊；抑菌活性；植物病原真菌；活性物质

一、引言

大花金鸡菊（CoreopsisgrandifloraHogg）为菊科金鸡菊属多年生宿根草本植物，原产于美洲，1938年作为观赏植物引入我国，现全国各地均有分布。该植物耐贫瘠、抗污染且繁殖力强。除具有观赏价值外，大花金鸡菊还具有一定的药用价值，全草可入药，其花中提取的食用色素主要成分为黄酮类化合物，具有清热解毒和降脂降压等功效。已有研究表明，大花金鸡菊根茎叶的挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等具有抑制作用，然而关于大花金鸡菊花抑菌活性物质的研究相对较少。植物源抑菌活性物质具有环境友好、低毒、不易产生抗药性等优点，在农业生产和医药领域具有广阔的应用前景。深入研究大花金鸡菊花中的抑菌活性物质，对于开发新型生物农药、保障农作物安全生产以及拓展大花金鸡菊的综合利用价值具有重要意义。

二、材料与方法

2.1实验材料

2.1.1植物材料

大花金鸡菊花于盛花期采自[具体采集地点]，采集后洗净、阴干，粉碎备用。

2.1.2供试病原菌

小麦赤霉病菌（Gibberellazeae）、苹果斑点落叶病菌（Alternariaalternataf.sp.mali）、辣椒炭疽病菌（Colletotrichumcapsici）、黄瓜枯萎病菌（Fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum）、苹果腐烂病菌（Valsamali）等植物病原真菌由[菌种保存单位]提供。

2.1.3主要试剂

无水乙醇、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、琼脂、马铃薯等均为分析纯试剂。

2.1.4主要仪器设备

旋转蒸发仪、电子天平、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、显微镜等。

2.2实验方法

2.2.1大花金鸡菊花提取物的制备

采用乙醇回流提取法。称取一定量的大花金鸡菊花粉末，置于圆底烧瓶中，加入10倍量的95%乙醇，回流提取2次，每次2h。合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到大花金鸡菊乙醇提取物浸膏。

2.2.2萃取分离

将大花金鸡菊乙醇提取物浸膏用适量蒸馏水混悬，依次用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，每种溶剂萃取3次。分别收集各萃取层，减压浓缩至干，得到正己烷萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水层萃取物。

2.2.3抑菌活性测定

采用菌丝生长速率法。将供试病原菌在PDA培养基上活化后，用打孔器打出直径为5mm的菌饼。在无菌条件下，将菌饼接种于含有不同浓度提取物或萃取物的PDA平板中央，每个处理重复3次。以含等量溶剂的PDA平板作为对照。将接种后的平板置于适宜温度的恒温培养箱中培养，待对照组病原菌长满平板后，测量各处理组病原菌菌丝的生长直径，计算抑菌率。抑菌率计算公式如下：

抑菌率（%）=（对照菌丝生长直径-处理菌丝生长直径）/对照菌丝生长直径×100%

2.2.4数据处理

实验数据采用SPSS软件进行统计分析，采用邓肯氏新复极差法进行差异显著性检验，P0.05表示差异显著。

三、结果与分析

3.1大花金鸡菊乙醇提取物对植物病原真菌的抑菌活性

当大花金鸡菊乙醇提取物浓度为2.0mg/mL时，对小麦赤霉病菌、苹果斑点落叶病菌、辣椒炭疽病菌和黄瓜枯萎病菌均有一定的抑制作用，抑制率分别为48.45%、31.94%、23.22%和22.69%（表1）。其中，对小麦赤霉病菌的抑制效果相对较好，其EC50为1.570mg/mL；对苹果斑点落叶病菌的EC50为2.872mg/mL。这表明大花金鸡菊乙醇提取物对部分植物病原真菌具有一定的抑菌活性，且对不同病原菌的抑制效果存在差异。

表1大花金鸡菊乙醇提取物对植物病原真菌的抑菌活性（浓度2.0mg/mL）

病原菌

抑菌率（%）

EC50（mg/mL）

小麦赤霉病菌

48.45

1.570

苹果斑点落叶病菌

31.94

2.872

辣椒炭疽病菌

23.22

-

黄瓜枯萎病菌

22.69

-

3.2大花金鸡菊乙醇提取物不同溶剂萃取物的抑菌活性

大花金鸡菊乙醇提取物不同溶剂萃取物中，正己烷层和水层的抑菌活性较高（表2）。正己烷萃取物对苹果腐烂病菌和小麦赤霉病菌的抑制效果显著，其EC50分别为1.111mg