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134株克罗诺杆菌多位点序列分型：遗传特征与公共卫生意义解析

一、引言

1.1研究背景与目的

克罗诺杆菌（Cronobacterspp.）作为一类重要的食源性致病菌，自被发现以来，一直受到全球食品与公共卫生领域的高度关注。该菌具有顽强的生存能力，能在多种极端环境中存活，如低水分活度、高渗透压等条件下，这使得其在食品加工、储存和运输过程中难以被彻底清除。婴幼儿配方奶粉等食品一旦被克罗诺杆菌污染，就可能成为传播媒介，引发严重的健康问题。

对于新生儿、早产儿以及免疫力低下的婴幼儿，克罗诺杆菌的威胁尤为巨大。感染后，可能引发脑膜炎、坏死性结肠炎和菌血症等严重疾病，不仅给患儿带来极大的痛苦，还可能导致永久性的神经损伤，甚至危及生命。据统计，全球范围内由克罗诺杆菌感染引发的婴幼儿病例虽数量相对其他常见食源性疾病较少，但因其高致死率和严重的后遗症，对婴幼儿健康构成了不容忽视的潜在风险。除婴幼儿外，老年人和免疫力低下的成年人也可能受到感染，引发不同程度的健康问题。

然而，目前对于克罗诺杆菌的研究仍存在诸多不足。虽然已确定其为条件致病菌，但不同菌株的致病机制、毒力差异以及在环境中的传播途径和生存特性等方面，仍有许多未知之处。深入研究克罗诺杆菌，揭示其遗传多样性、进化关系以及与致病性的关联，对于制定有效的防控策略，保障食品安全和公众健康具有重要的科学意义和实际应用价值。

本研究旨在通过对134株克罗诺杆菌进行多位点序列分型（MLST），全面分析其遗传多样性，确定不同菌株的序列型别，构建系统发育树，以清晰展现菌株间的亲缘关系。通过这些研究，期望能够深入了解克罗诺杆菌的种群结构和进化特征，为后续探究其致病机制、追踪污染源以及制定针对性的防控措施提供坚实的数据基础和理论支持。

1.2克罗诺杆菌概述

克罗诺杆菌隶属于肠杆菌科，是一类革兰氏阴性菌，其细胞形态呈短杆状，具有周生鞭毛，能够运动，并且为兼性厌氧菌。该菌的分类和命名经历了复杂的演变过程。最初，由于其能产生黄色色素，被认为是肠杆菌属中阴沟肠杆菌的生物变形种，被称作“黄色阴沟肠杆菌（yellow-pigmentedEnterobactercloacae）”。1980年，Farmer等人通过一系列的核酸杂交、生化试验、黄色菌落产物以及抗生素敏感性等实验，将其重新分类并命名为“阪崎肠杆菌(Enterobactersakazakii)”，正式归入肠杆菌属。随着研究的不断深入，2008年，Iversen利用16SrRNA基因序列分析、荧光标记-扩增性片段长度多态性指纹图谱、核糖体分型以及DNA杂交等先进技术，提出建立一个新属——克罗诺杆菌属（Cronobactergen.nov），将原来所有的阪崎肠杆菌都纳入其中。目前，克罗诺杆菌属包含多个种，如阪崎克罗诺杆菌(Cronobactersakazakii)、丙二酸盐克罗诺杆菌(C.malonaticus)、苏黎世克罗诺杆菌(C.turicensis)、莫金斯克罗诺杆菌(C.muytjensii)、都柏林克罗诺杆菌(C.dublinensis)等，其中阪崎克罗诺杆菌为该属的模式菌种。

克罗诺杆菌分布极为广泛，在自然界的各种环境中都能检测到其存在。从水体、土壤、植物根茎等自然环境，到家庭、工厂的生产设备等人工环境，甚至在临床病人的体内也有发现。在食品领域，它常见于婴幼儿奶粉、奶酪、腌肉、水、蔬菜、大米、面包、茶叶、草药、调味料及豆腐等多种食品中。婴幼儿奶粉因与新生儿和婴幼儿的健康密切相关，其被克罗诺杆菌污染的问题备受关注。有研究表明，在部分国家和地区的婴幼儿奶粉抽检中，克罗诺杆菌的检出率达到一定比例，成为新生儿感染克罗诺杆菌的主要感染渠道。

作为条件致病菌，克罗诺杆菌对大多数健康人群并不致病，但对于特定的易感人群，却具有很强的致病性。新生儿，尤其是早产儿、出生体重偏低以及免疫力低下的婴幼儿，是感染克罗诺杆菌的高危人群。感染后，可能引发多种严重疾病，其中脑膜炎最为凶险，病死率高达40%-80%，且幸存者往往会遗留永久性的神经损伤，如脑积水、脑脓肿、发育迟缓等后遗症。坏死性结肠炎和菌血症也是常见的感染病症，会对婴幼儿的消化系统和血液系统造成严重损害，影响其正常的生长发育。此外，老年人和免疫力低下的成年人感染克罗诺杆菌后，也可能出现不同程度的健康问题，如血流感染导致的菌血症、败血症，以及伤口感染、泌尿系统感染等。

1.3多位点序列分型技术（MLST）原理及应用

多位点序列分型技术（MultilocusSequenceTyping，MLST）是一种基于核酸序列测定的先进细菌分型方法。其基本原理是选择位于细菌基因组上不同位点的多个管家基因，管家基因是维持细菌基本生命活动所必需的基因，