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哈尔滨地区猪源致病性大肠杆菌耐药特征与基因分型解析

一、引言

1.1研究背景

大肠杆菌（Escherichiacoli）作为人和动物肠道的正常寄居菌，是肠道正常菌群的关键组成部分，对维持肠道微生态平衡起着重要作用。但在特定条件下，如机体免疫力下降或菌体侵入肠外组织时，大肠杆菌可转变为致病性大肠杆菌，引发严重的健康问题。对于猪而言，致病性大肠杆菌是一类重要的人畜共患病原菌，能导致仔猪黄痢、仔猪白痢和成年猪水肿病等疾病，发病率和死亡率均较高。

在养猪业中，猪源致病性大肠杆菌所引发的疾病一直是影响养殖效益的重要因素。仔猪黄痢常见于7日龄内仔猪，1-3日龄最为常见，是初生仔猪的急性、致死性传染病，发病率可达90%，死亡率达50%，临床症状以排黄色或黄白色水样粪便和迅速死亡为特征。仔猪白痢主要发生于10-30日龄仔猪，发病率高达80%，死亡率达50%，临床上以排灰白色浆状、糊状腥臭味稀粪为特征。断奶仔猪腹泻率一般在20%-30%，死亡率在2%-4%，部分猪场断奶仔猪腹泻率可高达70%-80%，死亡率高达15%-20%。猪水肿病大多发生在仔猪断奶后的1-2周，虽然发病和流行率相对较低，但发病过程快，病死率高，猪群死亡率可能从不易察觉的1%-3%到极端水平的50%-90%。这些疾病不仅给养猪业带来了巨大的经济损失，也对畜牧业的可持续发展构成了威胁。

哈尔滨地区作为我国重要的生猪养殖区域，养猪业在当地农业经济中占据重要地位。然而，随着养殖规模的不断扩大和养殖密度的增加，猪源致病性大肠杆菌感染的问题日益突出。由于不同地区的养殖环境、管理水平、用药习惯等存在差异，猪源致病性大肠杆菌的耐药性和基因分型也会有所不同。因此，针对哈尔滨地区猪源致病性大肠杆菌的耐药性和基因分型进行研究具有重要的现实意义。通过了解该地区猪源致病性大肠杆菌的耐药现状和基因分型特征，可以为临床合理用药提供科学依据，有效控制猪大肠杆菌病的发生和传播，保障养猪业的健康发展。

1.2研究目的

本研究旨在对哈尔滨地区猪源致病性大肠杆菌进行耐药性分析及基因分型研究，具体目标如下：

从哈尔滨地区养殖场采集病料，分离鉴定猪源致病性大肠杆菌，明确其在该地区的分布情况。

采用药敏试验，测定分离菌株对常用抗生素的耐药性，分析其耐药谱和耐药趋势，为临床治疗猪大肠杆菌病提供用药参考。

运用分子生物学技术，对猪源致病性大肠杆菌进行基因分型，了解不同基因型的分布特征，探究基因型与耐药性之间的关联，为深入研究其致病机制和传播规律奠定基础。

1.3研究意义

理论意义：本研究有助于深入了解哈尔滨地区猪源致病性大肠杆菌的耐药机制和基因分型特征，丰富了对大肠杆菌耐药性和分子流行病学的认识。通过探究基因型与耐药性之间的关系，可以为进一步研究细菌的耐药进化和传播规律提供理论依据，推动相关领域的学术发展。

实践意义：从临床治疗角度来看，明确猪源致病性大肠杆菌的耐药性，能够指导兽医在临床实践中合理选择抗生素，避免盲目用药和抗生素滥用，提高治疗效果，降低治疗成本。同时，对于养猪业的健康发展具有重要意义，通过有效控制猪大肠杆菌病的发生和传播，减少经济损失，保障生猪的质量和产量。此外，由于大肠杆菌是一种人畜共患病原菌，研究其耐药性和基因分型对于保障公共健康也具有重要作用，有助于降低人类感染耐药性大肠杆菌的风险，维护食品安全和公共卫生安全。

二、材料与方法

2.1样本采集

在2023年1月至2023年12月期间，从哈尔滨地区的10个不同规模的猪场采集样本。这些猪场涵盖了规模化养殖场和小型养殖户，具有一定的代表性。共采集猪粪便、肠道内容物和病变组织等样本200份，其中猪粪便100份，肠道内容物60份，病变组织40份。采集时，使用无菌棉签或无菌采样器具，确保样本不受污染。对于粪便样本，直接从猪直肠采集；肠道内容物则在无菌条件下从屠宰猪的肠道中获取；病变组织选取具有典型大肠杆菌感染症状的部位，如出现黄痢、白痢或水肿病症状的猪的相关组织。每个样本采集后，立即放入无菌容器中，并标记好采样地点、时间和猪的基本信息，如品种、日龄等。样本采集后，尽快送回实验室进行后续处理，若不能及时处理，则将样本保存在4℃冰箱中，但保存时间不超过24小时。

2.2大肠杆菌的分离与鉴定

2.2.1细菌分离培养

将采集的样本分别接种于麦康凯培养基和伊红美蓝培养基上。首先，用无菌接种环挑取少量样本，在培养基表面进行划线分离，以获得单个菌落。划线时，遵循从低浓度到高浓度的顺序，确保每个区域的菌落密度逐渐降低。将接种后的培养基置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。在麦康凯培养基上，大肠杆菌会形成圆形、扁平、边缘整齐、表面光滑湿润