原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
合成肽与载体蛋白的连接;引言;载体蛋白的选择：
除应具有较好的免疫原性外，还应具有足够的反应侧链氨基酸残基，以便与合成肽连接。;连接方式的选择：
大多数连接方法依赖于游离的氨基（Lys）、巯基（Cys）、酚基（Tyr）、羧基（Asp或Glu）的存在。选择连接的方法是肽与载体通过C－或N－末端残基连接。相应于蛋白质氨基端的肽通过其羧基末端氨基酸残基连接，而相应于蛋白质羧基端的肽通过其氨基末端氨基酸的残基连接。;四种方法;MBS连接法;;操作步骤：;4、将10mg合成肽溶于PBS中，如果合成肽不溶于PBS，则可溶于含6mol盐酸胍的0.1mol/LPB中。
5、将合成肽溶液与MBS/KLH结合物混合，以0.1mol/LHCL或0.1mol/LNaOH调节至pH7.3,室温孵育3h，置4℃蒸馏水中透析过夜，换一次蒸馏水后继续透析大于或等于4h，连接物置于4℃保存供一次试验用，或－20℃保存备用。
;凝胶层析;戊二醛偶连法;;EDCI法;第一步是肽与EDCI连接，将10mg合成肽溶于1mL双蒸水中，在磁力搅拌下加入EDCI40mg，用0.1mol/LHCl调节至pH4.5，室温反应5～10min；然后加入双蒸水溶解的KLH10mg/0.5mL，室温作用2h后，4℃透析过夜，冰箱保存均同上。
实验所用EDCI应新鲜配置。为了避免肽聚合的形成，含有磷酸盐，碳酸盐或氨基的缓冲液因影响其反应，应避免应用。;;BDB连接法;首先将合成肽与KLH混合，然后用BDB交联，即将5mg联苯胺-HCl溶于1mL0.2mol/L中，4℃条件下变振荡边加入NaNO2，4℃避光振荡避光振荡1h，该溶液可在-70℃保存一年，将KLH5mg溶于10mLpH9.0硼酸缓冲液中，加入合成肽2mg，置冰浴冷却；缓慢滴加0.1mLBDB,置4℃振荡2h，以0.1mol/NaOH调节至pH9.0，倒转试管数次，低温冰箱保存备用。
;本法有时形成不溶性连接物，混匀后即可使用。适当减少BDB与肽/蛋白载体的反应时间可避免不溶性连接物的形成。苯、BDB有致癌作用，应避免与皮肤直接接触！
文档评论（0）