第四章柠檬酸发酵微生物及发酵机理详解.pptVIP

第四章柠檬酸发酵微生物及发酵机理详解演示文稿;优选第四章柠檬酸发酵微生物及发酵机理;1893年首先发现某些青霉能分泌柠檬酸，但实践证明青霉并不适宜作为柠檬酸工业化生产的菌种。后来发现曲霉，特别是黑曲霉能分泌大量的柠檬酸。此外，棒曲霉、文氏曲霉、泡盛曲霉、芬曲霉等也能大量分泌柠檬酸。但是目前用于工业化的生产菌种几乎都是黑曲霉。

以石油、乙酸、乙醇等为原料时，一般是酵母作为柠檬酸的生产菌种。

至今世界上消费的柠檬酸主要采用发酵法生产。而最具商品竞争优势的是采用黑曲霉、文氏曲霉和解脂假丝酵母等菌种的深层发酵法。;一.黑曲霉;

;1.察氏琼脂培养基上:室温培养10～14天，菌落直径达2.5～3cm，由致密或中度疏松的白色或微黄色菌丝组成;菌丝着生丰富密集的直立分生孢子梗。菌落为碳黑色或深褐色,反面为无色或中央呈淡黄色,有霉味。

2.麦芽汁琼脂培养基上:菌落生长较快,室温下2周达5～6cm，平坦,密集遍布炭黑色孢子,反面无色或微黄,稍有霉味。分生孢子头典型地着生于较短的分生孢子枝上,成熟时呈柱状。

;3.马铃薯汁葡萄糖琼脂培养基上:菌落有辐射状沟纹,中间炭黑色,四周新生的菌丝为白色,树枝状。

黑

曲

霉

形

态

结

构;(二)分生孢子头

幼时呈球形,渐变为放射形或裂成二瓣或多瓣,柱状,一般700～800μm,典型大的呈黑色,小而不典型的呈褐色,近球形,较大的不全部着色.

;(三)分生孢子梗

自基质生出,长短,大小可变,一般为(1.5～3μm)×(15～20μm),壁光滑,较厚,无色或有淡褐色阴区,尤其是在上半部分。

(四)顶囊

球形或近球形,直径一般为(45～75μm),常有较小者,偶尔也有80μm的较大者。

;(五)小梗

双层,褐色,遍生.初生小梗随菌种和孢子头成熟度而变化,成熟时有的产生横隔,次生小梗较为均匀。

(六)分生孢子

典型的成熟时呈球形,偶尔稍偏,不同菌株大小不同,呈褐色,壁较厚,不规则,粗糙呈现低度或中度突起或毛刺,不连续,表面看似乎排列明显的色条。;目前国内生产用的5016、3008和

G23-4菌种的基本特征;3008菌株在察氏琼脂培养基上菌落生长相当缓慢，28℃培养4-5天，直径仅仅。在麦芽汁琼脂培养基上生长较快，28℃培养7天直径可达，分生孢子穗大量繁殖，颜色为炭黑至深褐黑色，无分泌液，反面无色。菌丝隔膜密。菌细胞短而粗，菌球体较小，该菌株更能适应高浓度发酵。;菌株G23-4系由r-144诱变获得。菌落为纯白色，孢子油集中在菌落中央，较细小，均匀，深棕色，菌落边缘的菌丝较长、疏松、呈羽绒状。;生活周期

黑曲霉属半知菌纲,一般只进行无性繁殖,由孢子发芽开始到新孢子形成、成熟,为一个生活周期.;;孢子在液体培养基中培养6-8h开始萌发出芽，长出多根芽，逐渐形成菌丝，菌丝不久即出现分枝。黑曲霉菌丝是多细胞结构，有横隔，其中可育细胞称为足细胞。由足细胞长出分生孢子梗，分生孢子梗顶端泡囊的聚集并与原生质膜的融合，使顶端膨大形成顶囊，上面遍生二层小梗。小梗上长出成链的孢子。这样一个生活周期约50个小时。但是黑曲霉菌丝是不断地生长延长的，孢子也逐渐不断地产生，直至营养枯竭为止。;培养基

;培养基组成;二、解脂假丝酵母

1976年酵母出现在柠檬酸生产中，烃类是最佳碳源，所得柠檬酸产率最高可达14.3mg/ml。酵母的优越性是它们的烷烃发酵产柠檬酸能力远强于黑曲霉，对烷烃转化率可达56%。主要菌种有：解脂假丝酵母、解脂腹膜胞酵母、季也蒙假丝酵母。

;（一）解脂假丝酵母形态特征

在麦芽汁中25℃培养3d,细胞呈卵形至长卵形，在狭长或宽大的基部上出芽。可能存在假菌丝、真菌丝及节孢子。可形成菌噗，低部可形成菌体沉淀，于17℃下培养1个月，则形成菌体沉淀和菌醭，不能发酵。

在麦芽汁琼脂培养基上17℃培养1个月,菌落呈奶油色,湿润或无光泽,柔软或粗糙,有微皱或粗皱.

;在马铃薯或玉米粉琼脂载片培养时,可形成丰富的假菌丝和具有横隔的真菌丝.在真菌丝和假菌丝的顶端或中间,可见单个或成双的芽生孢子,有时还存在节孢子.

（二）培养基

解脂假丝酵母生产柠檬酸的培养基如下表：

;成分;第二节黑曲霉柠檬酸高产菌的

形态特征和生理特征;3.菌丝顶端着生稀疏的大型黑褐色孢子穗,成熟后呈开花状而崩裂.

4.顶囊呈球形.

5.小梗分两层,初生小梗和次生小梗区别明显，初生小梗（30～31μm）ｘ7μm，次生小梗（9～13）μmｘ3.8μm