DB65_T 4504-2022 马血液梨形虫检测技术规程.docxVIP

ICS11.220

CCSB41

OB65

新疆

维吾尔自治区地方标准

DB65/T4504—2022

马血液梨形虫检测技术规程

Technicalregulationofhorsebloodpiroplasmadetection

2024-2-23发布2024-4-10实施

新疆维吾尔自治区市场监督管理局发布

DB65/T4504—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由新疆农业大学提出。

本文件由新疆维吾尔自治区畜牧兽医局归口并组织实施。

本文件起草单位：新疆农业大学。

本文件主要起草人：张杨、宋瑞其、张伟、巴音查汗·盖力克、郭庆勇、张梦圆、王盼举、闻秀秀、李才善。

本文件实施应用中的疑问，请咨询新疆农业大学。

对本文件的修改意见建议，请反馈至新疆维吾尔自治区畜牧兽医局(乌鲁木齐市新华南路408号)、新疆农业大学(乌鲁木齐市农大东路311号)、新疆维吾尔自治区市场监督管理局(乌鲁木齐市新华南路167号)。

新疆维吾尔自治区畜牧畜牧兽医局联系电话：0991-8568089;传真：0991-8527722;邮编：830004

新疆农业大学联系电话：0991-8763453;传真：0991-8763453;邮编：830052

新疆维吾尔自治区市场监督管理局联系电话：0991-2818750;传真：0991-2311250;邮编：830004

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DB65/T4504—2022

马血液梨形虫检测技术规程

1范围

本文件规定了马血液梨形虫病的术语和定义、PCR诊断的技术要求。

本文件适用于养马场(户)、动物诊疗机构和动物防疫防控机构对马梨形虫病的防治。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

马梨形虫病equinepiroplasmosis

由泰勒虫属的马泰勒虫(Theileriaequi)和巴贝斯属的驽巴贝斯虫(Babesiacaballi)寄生于马属动物红细胞、淋巴细胞而引起的一类蜱传血液原虫病。

3.2

马泰勒虫theileriaequi

隶属于原生动物门(Protozoa)、顶复亚门(Apicocomplexa)梨形虫纲(Piroplasmea)、梨形虫目(Piroplasmida)、泰勒科(Theileriidae)、泰勒属(Theileria)的马泰勒虫(Theileriaequi)。

3.3

驽巴贝斯虫babesiacaballi

隶属于原生动物门(Protozoa)、顶复亚门(Apicocomplexa)梨形虫纲(Piroplasmea)、梨形虫目(Piroplasmida)、巴贝斯科(Babesiida)、巴贝斯属(Babesia)的驽巴贝斯虫(Babesiacaballi)。

3.4

马泰勒虫生活史lifecycleoftheileriaequi

参见附录A。

3.5

驽巴贝斯虫生活史lifecycleofbabesiacaballi

参见附录B。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)

dNTPs:脱氧核苷酸三磷酸(deoxynucleotidetriphosphate)

Taq:水生栖热菌(Thermusaquaticus)

DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)

DEPC:焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate)

DB65/T4504—2022

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5诊断

5.1马泰勒虫病PCR诊断

5.1.1主要设备、耗材和试剂

高速离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、4℃冰箱、-20℃冰箱、移液器(10μL,100μL,1000μL)、无菌采血管、无菌采血针、1.5mLEP管、吸头(10μL,100μL,1000μL)、PCR反应管、核酸提取试剂盒、PCR反应试剂、荧光核酸凝胶染色试剂、6×上样缓冲液(loadingbuffer)。

5.1.2样品采集、保存

进行颈静脉无菌采血。采集疑似马属动物无菌抗凝血约10mL,及时进行核酸提取。若采集的血液暂时无法进行核酸提取，可暂时放入-20℃冰箱短暂保存。

5.1.3样品DNA提取

宜使用核酸提取试剂盒对血液样