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芒果炭疽病菌拮抗酵母的筛选、鉴定及其保护剂的评价

摘要

本研究旨在筛选出对芒果炭疽病菌具有显著拮抗作用的酵母菌株，并对其进行鉴定，同时评价不同保护剂对拮抗酵母活性及抑菌效果的影响。通过采集芒果果实及果园土壤样本，采用平板对峙法从样本中分离筛选拮抗酵母，利用形态学观察、生理生化试验及分子生物学方法对筛选得到的菌株进行鉴定。进一步通过室内抑菌试验，评估不同保护剂处理后拮抗酵母对芒果炭疽病菌的抑制能力。研究结果表明，成功筛选到[X]株对芒果炭疽病菌具有较强拮抗作用的酵母菌株，经鉴定为[具体属种名称]；同时确定了[具体保护剂名称及配方]对拮抗酵母的活性及抑菌效果具有较好的保护和提升作用，为芒果炭疽病的生物防治提供了新的菌株资源和保护剂配方，对推动芒果产业的绿色健康发展具有重要意义。

关键词

芒果炭疽病菌；拮抗酵母；筛选；鉴定；保护剂；生物防治

一、引言

芒果作为世界重要的热带水果之一，在全球热带和亚热带地区广泛种植。然而，炭疽病是影响芒果生产和贮藏保鲜的主要病害之一，由胶孢炭疽菌（Colletotrichumgloeosporioides）等多种炭疽病菌引起。传统的化学防治方法虽然在一定程度上能够控制病害的发生，但长期使用化学农药不仅会导致病原菌产生抗药性，还会造成农药残留，对环境和人体健康产生潜在威胁。因此，寻找安全、高效、环保的生物防治方法成为当前芒果炭疽病防治研究的热点。

拮抗酵母作为一类重要的生防微生物，具有来源广泛、抑菌谱广、对环境友好等优点，在果蔬采后病害防治中展现出巨大的应用潜力。通过筛选高效的拮抗酵母菌株，并研发合适的保护剂，能够提高拮抗酵母在实际应用中的稳定性和抑菌效果，为芒果炭疽病的生物防治提供新的技术手段。本研究开展芒果炭疽病菌拮抗酵母的筛选、鉴定及其保护剂的评价工作，旨在为芒果炭疽病的生物防治提供理论依据和实践指导。

二、材料与方法

（一）材料

病原菌：从发病的芒果果实上分离纯化得到芒果炭疽病菌（Colletotrichumgloeosporioides），保存于实验室斜面培养基中备用。

样本采集：在[具体芒果种植区域]的芒果果园中，采集健康及发病芒果果实表面组织、果园土壤样本各[X]份，将样本置于无菌采样袋中，低温保存并尽快带回实验室进行处理。

培养基

马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：用于病原菌的培养和保存，以及拮抗酵母的分离筛选。配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，自然pH。

酵母浸出粉胨葡萄糖培养基（YPD）：用于酵母的培养和扩大繁殖。配方为：酵母浸出粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，自然pH。

孟加拉红培养基：用于酵母的分离纯化，配方为：蛋白胨5g，葡萄糖10g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，孟加拉红0.033g，琼脂20g，氯霉素0.1g，蒸馏水1000mL，pH7.2。

（二）方法

拮抗酵母的分离筛选

样本处理：将采集的芒果果实表面组织用无菌水冲洗后，取果肉组织[X]g，加入[X]mL无菌水，振荡混匀，制成果实组织悬液；将采集的土壤样本[X]g，加入[X]mL无菌水，充分振荡后静置，取上清液作为土壤悬液。

分离纯化：分别取果实组织悬液和土壤悬液[X]μL，涂布于孟加拉红培养基平板上，28℃恒温培养2-3d。观察平板上的菌落形态，挑取形态各异的酵母样菌落，通过划线分离法在YPD培养基上进行纯化，纯化后的菌株保存于4℃冰箱中备用。

初筛：采用平板对峙法进行初筛。在PDA培养基平板中央接种直径5mm的芒果炭疽病菌菌饼，在距离菌饼边缘2cm处等距离接种分离得到的酵母菌株，每平板接种4株，以不接种酵母的病原菌平板作为对照。28℃恒温培养3-5d，观察并测量病原菌菌落与酵母菌株之间的抑菌圈大小，筛选出抑菌圈直径大于[X]mm的酵母菌株进入复筛。

复筛：将初筛得到的酵母菌株接种于YPD液体培养基中，28℃、180r/min振荡培养24h，制成菌悬液（浓度为[X]CFU/mL）。采用果实刺伤接种法进行复筛，选取成熟度一致的健康芒果果实，用75%酒精消毒后，在果实赤道部位用无菌针进行刺伤（伤口深度约2mm），每个果实接种2处，每处接种[X]μL酵母菌悬液，对照组果实接种等量无菌水。接种后在伤口处接种直径3mm的芒果炭疽病菌菌饼，将果实置于湿度为90%、温度为28℃的恒温恒湿箱中培养5d，观察果实发病情况，计算病情指数，筛选出病情指数显著低于对照组的酵母菌株作为目标拮抗酵母菌株。

拮抗酵母的鉴定

形态学观察：将筛选得到的拮抗酵母菌株接种于YPD培养基平板上，28℃培