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免疫分析法的建立

一、免疫分析的基本试剂

（一）品

品是免疫分析法定量的依据，由于以品的量用来表示被涮物质的量，故品与被测物

质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。品作为定量的基准。应要求高度纯化。品除含量应具

有准确性外，还应具备稳定性，即在合理的条件下保持原来的特性。

按实验要求，将品用缓冲液配成含不同剂量的溶液，用于制作曲线。

（二）标记物

标记抗原应具备：①比，以保证方法的灵敏度；②免疫活性好；③所用的核素的半衰期尽可

能长，标记一次可较长时间使用，这对来之不易的抗原尤其重要；④标记简便、易防护。

125I时达5000～

要准确测量B与F的性，必须有足够的性强度。所选用的标记抗原的量，在使用

15000cpm。

（三）抗体

应选择特异、亲和力强及滴度好的抗体，用于免疫测定。

根据稀释曲线，选择适当的稀释度，一般以结合率为50%作为抗的稀释度。

（四）B与F分离剂

以2%加膜活性炭溶液为例，2%加膜活性炭溶液的配制：

活性炭2g（木材厂生产，森工牌732型）

右旋糖酐T200.2g

加0.1mol/LPB至100ml

电磁搅拌1h，然后置于变通冰箱冰箱待用。

（五）缓冲液

免疫分析技术所用的缓冲液有多种，要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。

目前最常用的缓冲液有下列几种：①磷酸盐缓冲液；②醋酸盐缓冲液；③巴比妥缓冲液；④Tris–HCl

缓冲液；⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。

在缓冲液中，除必须有弱酸及弱酸的盐成分外，还应根据不同检测项目加入下列物质：①保护蛋白：

常用的有牛白蛋白或白明胶，浓度为0.1%～0.2%，用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂：

多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂：如测定心钠素等肽类激素时，要加

入适量的抑肽酶，用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解；又如测定cAMP、cGMP时，需加入EDTA·2Na，抑

制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂：在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时，必须加阻断剂，使和蛋白质相

结合的激素，变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。

⑤载体蛋白：采用二抗作B与F分离剂时，要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常。在测

定不含有血浆蛋白的样品时，用PEG沉淀剂分离B、F，必须加适量γ球蛋白或正常人混合。

在神经肽的RIA时，常用PELH缓冲液，（按1000ml,pH7.6）：

Establishmentofradioimmunoassay

1.Basicreagentsforradioimmunoassay

(1)Standard

products

Thestandardsubstanceisthebasisforquantificationofradioimmunoassay.Sincetheamountofthestandardsubstanceisusedto

expresstheamountofthesubstancebeingtested,thestandardsubstanceandthesubstancebeingtestedshouldhavethesamechemical

structureandhavethesameimmunologicalactivity.Standardsserve