嗜热链球菌高密度培养及冷冻保护的研究.pptVIP

1.引言1.1嗜热链球菌1.2高密度发酵1.3乳酸菌保护剂1.4研究内容与意义1.引言1.1嗜热链球菌属于兼性厌氧的革兰氏阳性乳酸菌，在食品、医药及畜禽生产中有着广泛的应用。1.引言1.引言脂肪酸的变化冷刺激对细胞最重要的影响之一是使细胞膜从固有的结晶性液态转变为凝胶态，导致流动性下降。但是，冷冻过程中也可以激活一些脱氢酶类，在这些脱氢酶的催化作用下，乳酸菌细胞膜上的饱和脂肪酸可以转变为不饱和脂肪酸。由于不饱和脂肪酸磷脂的熔点较低，从而冷冻过程中细胞膜的流动性增强，菌体的活性可以得到保护。1.引言冷激蛋白(CSPs)合成微生物在受到低温刺激时，会发生冷激反应，此时会合成许多冷诱导蛋白(Cold-inducedProteins，CIPs)，其中最为重要的是冷激蛋白(Cold-shockproteins，CSPs)，分子量大约在7kD。在低温环境下，这类蛋白作为RNA陪伴分子与RNA通过非特异性结合，可阻止mRNA二级结构的形成，抑制其它蛋白的转录和翻译。1.引言核糖体变化微生物核糖体对温度敏感。随着温度的升高，核糖体翻译的速率将高于相应氨基酸的tRNA(氨基酰tRNA)的供应速率，核糖体的酰胺基位点随之空缺。此外，核糖体在冷刺激之后翻译的效率将降低。1.引言核酸变化温度能改变DNA分子的超螺旋结构。DNA分子的延伸由DNA促旋酶和DNA拓扑异构酶Ⅰ来调控。DNA相关功能，如复制、转录、重组等，都与DNA超螺旋结构具有紧密联系。1.引言保护剂1.引言预冷处理产生冷应激蛋白饱和脂肪酸转变为不饱和脂肪酸1.引言pH调节发酵液pH为5.5时，有较好的抗冷冻性不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比例1.引言1.4研究内容与意义研究内容菌株筛选培养基优化及高密度发酵工艺优化冷冻保护剂配方及冻干工艺优化目的及意义提高菌体产率提高冷冻保护效果为国内乳酸菌发酵剂的应用及早日摆脱对进口发酵剂的依赖奠定基础2.材料与方法2.1材料菌株仪器、试剂等3.结果与分析3.1嗜热链球菌中优良菌株的筛选3.2ND03培养基优化3.3ND03静态培养条件3.4ND03高密度发酵3.5ND03冻干保护剂及工艺3.结果与分析3.1嗜热链球菌中优良菌株的筛选初筛按37℃发酵7h滴定酸度≥55°T的标准进行筛选，从289株嗜热链球菌中筛选出了62株(筛出率21.5%)目标菌。3.结果与分析复筛3.结果与分析发酵特性3.结果与分析3.2ND03培养基优化碳源3.结果与分析碳源正交3.结果与分析氮源3.结果与分析氮源正交3.结果与分析碳氮量及碳氮比3.结果与分析缓冲盐3.结果与分析微量元素3.结果与分析生长因子3.结果与分析三因素三水平旋转正交试验3.结果与分析3.3静态培养条件3.结果与分析3.4高密度发酵中和剂3.结果与分析pH值3.结果与分析搅拌速度3.结果与分析通气条件3.结果与分析3.5ND03冻干保护剂及工艺冻干工艺3.结果与分析保护剂添加比例3.结果与分析保护剂配方3.结果与分析4.结论4.1筛菌289株嗜热链球菌以商业发酵剂中的嗜热链球菌Yc为对照菌，依次经过以观察凝乳状态为指标的初筛试验，以测定pH值到达4.5时的时间为指标的复筛试验，以测定发酵全脂乳特性等为指标的试验，最终得到在酸奶发酵剂中具有潜在优势的12株优良嗜热链球菌。4.结论4.2培养基优化以嗜热链球菌ND03为代表菌株，对AST培养基依次经过碳源、氮源、碳氮比例、微量元素、缓冲盐和生长因子的筛选，采用响应面设计对各成分比例进行优化，得到嗜热链球菌的最适培养基。在此培养基中37℃静止培养8～10h，培养液活菌数可达到1.02×1010CFU/mL，比在AST培养液中的活菌数提高近13倍。4.结论4.3高密度发酵工艺在筛选出的最适培养基中对ND03静态培养条件进行优化，并在5L发酵罐上对以中和剂、pH值、搅拌速度和通气条件等影响因素进行优化，得到最佳高密度发酵工艺。在此工艺下，ND03发酵时间为6h～6.5h，活菌数达到1.80×1010CFU/mL，发酵时间比