DB37T 3127-2018 禽波氏杆菌凝集试验和间接ELISA抗体检测技术规范.docxVIP

ICS11.220

B41DB37

山东省地方标准

DB37/T3127—2018

禽波氏杆菌凝集试验和间接ELISA抗体

检测技术规范

TechnicalGuidelineofAgglutinationTestandIndirectELISAforAntibodyDetectionofBordetellaavium

2018-02-02发布2018-03-02实施

山东省质量技术监督局发布

I

DB37/T3127—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧兽医局提出。

本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准主要起草单位：山东农业大学、山东省动物疫病预防与控制中心。

本标准主要起草人：朱瑞良、魏凯、胡莉萍、黄河、杨萍萍、柳洪洁、刘红红、王敏。

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DB37/T3127—2018

禽波氏杆菌凝集试验和间接ELISA抗体检测技术规范

1范围

本规范规定了禽波氏杆菌凝集试验和间接ELISA抗体检测技术的术语和定义、试剂或材料、仪器设备，利用平板凝集试验、试管凝集试验和间接酶联免疫吸附实验(iELISA)检测禽波氏杆菌抗体的方法和技术要求。

本规范适用于禽场禽波氏杆菌的流行病学调查、诊断和疫情监测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB14925实验动物环境及设施

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

禽波氏杆菌Bordetellaavium,B.avium

是波氏杆菌属(ThegenusBordetella)四个种中的一个新种，1984年由Kersters确认。

3.2

试管凝集试验tubeagglutinationtest

常用已知已定量的抗原与一系列稀释的禽的血清混合，在保温放置后观察结果，以判定受检血清有无相应抗体及其效价。多用于半定量和定量试验。

3.3

间接酶联免疫吸附实验indirectenzyme-linkedimmunosorbentassay,iELISA

ELISA是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。iELISA是基于ELISA反应原理设计的，包被抗原后加入待测抗体，反应后洗板，加入酶标二抗，反应后再洗板，加入底物显色。

4试剂或材料

4.1禽波氏杆菌标准株

2

DB37/T3127—2018

禽波氏杆菌P5株，购自中国兽医药品监察所。

4.2禽波氏杆菌阳性血清

SPF鸡经免疫禽波氏杆菌抗原三次后获得的血清，每次免疫间隔两周。

4.3阴性血清

从SPF鸡分离的血清。

4.4待检禽血清

采集禽的血液，于37℃温箱中静置2h,收集析出的血清。

4.5生化试剂

灭菌0.5%石炭酸生理盐水、PBS、PBST、Tris-HC1、牛血清白蛋白(BSA)、底物反应液(具体配制方法见附录A)。

5仪器设备

5.1平板(玻板、白瓷板或载玻片)。

5.2微量移液器：量程为20μL～100μL。

5.3接种环。

5.4试管架。

5.5小试管(口径8mm～10mm)。

5.6灭菌吸管(1mL)。

5.7恒温培养箱。

5.8匀速振荡器。

5.996孔ELISA酶标板。

5.10酶标仪(波长范围340。

6禽波氏杆菌抗体检测平板凝集试验

6.1用20μL微量移液器分别吸取三滴禽波氏杆菌P5株标准抗原于平板上。

6.2再分别取禽波氏杆菌阳性抗体、阴性血清和待检禽血清各一滴加入上述抗原液中，并用接种环混合均匀，3min～5min观察结果。

6.3平板凝集试验可参考图1:

阳性抗原

阳性抗原

阳性血清