血凝HA和血凝抑制HI试验一实验内容1.血凝试验HA检测新.pptVIP

三、实验材料

实验器材：

移液器（50ul）、枪头和枪头盒、枪架

禽类采血器、碘伏棉球、酒精棉球

离心机、离心管

小烧杯、大烧杯

96孔v型反应板、振荡器

实验试剂：

新城疫病毒抗原、阳性血清、阴性血清与待检血清、生理盐水、抗凝剂96孔v型反应板振荡器新城疫病毒抗原新城疫阳性血清四、实验原理（一）HA原理：某些病毒的血凝素纤突,能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（hemagglutination，HA）,也称直接血凝反应（红细胞不流淌）,利用这种特性设计的试验称血凝试验。病毒颗粒红细胞（二）血凝抑制试验（HI）原理：当病毒悬液（抗原）中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒的血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。Iamlate！抗体抗原红细胞抗原抗体结合五、1%鸡红细胞液的制备采血：用注射器吸取枸橼酸钠抗凝剂0.5mL，采血约2～4mL，轻轻混合均匀，拔下针头，将血液注入15ml离心管中，加3-4倍体积生理盐水。洗涤鸡红细胞3~5次：将离心管中的血液经2000r/min离心5~10min，弃上清液。沉淀物加入生理盐水，轻轻混合，再经2000r/min离心5~10min，用移液器移去上清液及沉淀物上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，制得红细胞泥。1%鸡红细胞悬液配制：吸取压积红细胞泥与生理盐水以1:99进行配制1%鸡红细胞悬液。取50ml烧杯，加入19.8ml生理盐水，吸取200ul红细胞泥注入烧杯中，用1ml移液器反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀，备用。注意：制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可再使用。红细胞上层为上清液，下层为沉淀物血凝试验（HA)操作步骤：1、在96孔V型反应板上第一排的1－12孔内各加入25ul生理盐水，换枪头。2、吸取25μL病毒悬液加入第l孔，枪头浸于液体中缓慢吹吸3-5次，使之充分混匀；从第1孔吸取25μL病毒液加入第2孔，充分混匀后吸取25μL加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取25μL弃之，换枪头。3、在1－12孔每孔再加入25ul生理盐水，换枪头。4、在1－12孔中，每孔加入25ul的1％鸡红细胞悬液（注意：将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。5、将96孔V型反应板置于振荡器上振荡1min或轻叩反应板混合反应物，放于室温（20～25℃）或37℃中静置30～40min。当第12孔红细胞对照孔（C孔）红细胞呈明显的钮扣状沉到孔底时判定结果。6、HA结果判定：能使红细胞100%凝集的病毒最高稀释倍数为该病毒的血凝效价。六、血凝试验（HA)

②③④①生理盐水/ul生理盐水/ul血凝试验操作步骤一、实验内容1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体---用已知抗原来检测被检血清中有无相应的特异性抗体及抗体水平。二、实验目的掌握HA和HI试验基本原理。掌握1%红细胞配制方法；掌握HA试验操作步骤和结果判定方法；掌握四单位病毒配制的计算方法；掌握HI试验操作步骤和结果判定方法。血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验