血液涂片制备和细胞染色杨华甘肃农业畜牧工程系06课件.pptxVIP

血液涂片制备和细胞染色杨华甘肃农业畜牧工程系06课件.pptx

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血液涂片制备和细胞染色;选取1张边缘光滑的载玻片作推片,用左手的拇指和中指夹持一张洁净载玻片的两端,取被检血液一滴(最好是新鲜的未加抗凝剂的血液),置于载玻片的右端,;右手持推片,置于血滴前方,并轻轻向后移动推片,使之与血液接触,待血液扩散开后,再以30°~45°角度向前匀速推进,形成一血膜。;良好的血片,其头、体、尾明显,血液分布均匀,薄厚适宜,血膜边缘整齐,并留有一定空隙,对光观察呈霓虹色。待血膜自然风干后,于载玻片两端留有空隙处注明动物种类、编号、日期等,即可进行染色。

;推片时,血滴越大,角度(两玻片之间的锐角)越大,推片速度越快,则血膜越厚;反之血膜越薄。白细胞分类计数的血膜宜稍厚,进行红细胞形态及血原虫检查的血片宜稍薄。推好的血片可于空气中左右挥动,使其迅速干燥,以防细胞皱缩而变形。

;血液涂片的染色可选用下列方法之一(瑞氏染色法、姬姆萨染色法、瑞姬氏复合染色法),但瑞氏染色法较常用。

;(1)瑞氏染色法:

先用玻璃铅笔在血膜两端各划一竖线,以防染液外溢,将血片平置于水平染色架上,在血片上滴加瑞氏染液,待染色1~2min后,再加等量磷酸盐缓冲溶液(pH6.4~6.8,或中性蒸馏水),混合均匀后,继续染色3~5min,用蒸馏水冲洗涂片,自燃干燥或用吸水纸吸干,待检。染色良好的血片应呈樱桃红色。

;(2)姬姆萨染色法:

先将涂片用甲醇固定3~5min,然后置于新配的姬姆萨应用液中染色30~60min,取出血片,用蒸馏水冲洗,自然干燥或用吸水纸吸干,待检。染色良好的涂片应呈玫瑰紫色。

;(3)瑞姬氏复合染色法:

先于血膜上滴加染液,经0.5~1min后,再加人等量pH6.8磷酸盐缓冲溶液混匀,继续染色5~10min,水洗,干燥,待检。

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